CD74（恒定链）对髓质胸腺上皮细胞的数量和成熟的调节作用及其机制研究
目的: 胸腺是中枢免疫器官，也是T淋巴细胞分化、发育和成熟的场所。胸腺上皮细胞（Thymicepithelialcells，TECs）是胸腺中最重要的基质细胞，是T细胞发育分化以及T细胞受体库选择和特异性谱系分化不可或缺的一类细胞。胸腺上皮细胞由位于皮质区域的皮质胸腺上皮细胞(Corticalthymicepithelialcells，cTECs)以及位于髓质区域的髓质胸腺上皮细胞(Medullarythymicepithelialcells，mTECs)组成。其中在成年鼠的胸腺上皮细胞中，mTECs占90％以上，主要在胸腺细胞的阴性选择和自我耐受形成中起着重要作用，皮质胸腺上皮细胞则主要参与阳性选择。CD74是主要组织相容性复合体Ⅱ类分子(MajorhistocompatibilitycomplexⅡ，MHCⅡ)的伴侣，是一种非多态跨膜糖蛋白，其主要表达于抗原提呈细胞，如B细胞、树突状细胞和TECs，可作为胸腺上皮细胞肿瘤的分类的标志。然而，CD74在TECs亚群中的表达以及作用机制目前尚不清楚。因此，本研究主要探讨CD74敲除后对TECs的影响，以阐明CD74在胸腺形成以及胸腺上皮细胞发育过程中的重要作用，为后续胸腺上皮肿瘤的分级以及诊断和靶向治疗提供理论基础。 方法: 1.本项目通过下载已知的野生型小鼠胸腺上皮细胞的单细胞转录组测序结果，结合生物信息学分析技术以阐明CD74在胸腺上皮细胞及其亚群中的表达情况。 2.利用CD74基因敲除小鼠模型，结合流式细胞技术分析CD74敲除后对胸腺上皮细胞发育及成熟的影响。 3.分选CD74敲除小鼠的髓质胸腺上皮细胞，提取RNA后应用转录组测序以及生物信息学技术进行分析，探究CD74敲除后小鼠髓质胸腺上皮细胞中关键信号通路的变化，并且通过流式细胞技术、胸腺上皮细胞体外培养技术、免疫荧光技术以及免疫蛋白印迹方法验证生物信息分析的相关实验结果。 4.应用流式细胞技术分析CD74缺失后对胸腺T细胞以及外周T细胞的影响。 结果: 1.CD74主要表达于髓质胸腺上皮细胞中成熟的细胞群以及皮质胸腺上皮细胞群，且CD74的表达水平与MHCⅡ类分子的表达近乎一致。 2.CD74敲除的小鼠胸腺髓质区域减少，髓质胸腺上皮细胞数量减少，髓质胸腺上皮细胞表面的成熟标志如MHCⅡ、CD80等分子表达减少，细胞成熟受阻。 3.CD74敲除后，髓质胸腺上皮细胞中NF-κB信号通路显著下降，体外培养的原代胸腺上皮细胞中总的p65蛋白水平以及磷酸化的p65蛋白水平显著降低，免疫荧光结果显示髓质胸腺上皮细胞中NF-κB-p65入核减少，尤其是在RANKL刺激以后，NF-κB-p65入核减少更为明显。 4.CD74敲除后虽然胸腺大小没有发生改变，但是胸腺中的CD4+T细胞发育严重受损，表现为CD4+T细胞比例降低，数量减少，而外周的CD8+T细胞比例相对增加。胸腺原有输出细胞明显减少，此外，调节性T细胞也受到了影响，表现为胸腺中的调节性T细胞比例和数量减少，外周调节性T细胞的比例相对增加而细胞绝对数量减少。 结论: 我们的结果表明，CD74参与调节mTECs细胞结构和成熟，影响CD4+T细胞的发育。CD74敲除导致髓质区域和mTECs数量减少及成熟受阻的主要原因之一是由于mTECs中经典的NF-κB信号通路受损。
胸腺上皮肿瘤;髓质胸腺上皮细胞;组织相容性复合体Ⅱ类分子;NF-κB信号通路;CD74
南方医科大学
博士
临床检验诊断学
裘宇容
2020
中文
R736.3
2023-07-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）