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目录
第一章文献综述
1．2重金属危害
1．3重金属污染修复技术
1．3．1物理修复技术
1．3．2化学修复技术
1．3．3植物修复技术
1．4植物对重金属的畜集机制
1．4．1重金属在植物中的吸收和转运
1．4．2重金属在植物中的区室化
1．4．3重金属与配体的螯合作用
1．4．4重金属对植物的氧化胁迫
1．5超积累植物对重金属的超富集机制
1．5．1超积累植物的种类
1．5．2超积累植物对重金属的强吸收机制
1．5．3超积累植物对重金属的高效转运机制
1．5．4超积累植物对重金属的有效脱毒害机制
1．6选题依据、技术路线及研究意义
第二章东南景天悬浮细胞超耐受镉的特征
2．1引言
2．2实验材料与试剂
2．2．1植物材料
2．2．2常用试剂与培养基
2．3实验方法
2．3．1东南景天的培养及镉处理
2．3．2东南景天悬浮细胞的培养及镉处理
2．3．3总RNA的提取及纯化
2．3．4cDNA的合成及荧光定量PCR
2．3．5东南景天悬浮细胞转录组测序
2．3．6镉含量的测定
2．3．7镉吸收速率和外排速率的测定
2．4实验结果
2．4．1东南景天悬浮细胞对镉的耐受与富集
2．4．2东南景天悬浮细胞对镉吸收和外排作用
2．4．3东南景天悬浮细胞转录组的测序拼接及质量分析
2．4．4东南景天悬浮细胞转录组中基因功能注释
2．4．5重金属转运蛋白基因差异表达分析
2．4．6SaHMA2基因在东南景天中的表达
2．5讨论
第三章东南景天植物器官超富集镉的特征
3．1引言
3．2实验材料与试剂
3．2．1植物材料
3．2．2常用试剂与培养基
3．3实验方法
3．3．1细胞壁及其组分的提取
3．3．2植物螯合肽和谷胱甘肽的含量测定
3．3．3水溶性镉螯合复合物的分离
3．3．4糖醛酸类物质的测定
3．4实验结果
3．4．1东南景天根、茎和叶细胞璧镉的含量与分布
3．4．2东南景天根、茎和叶中的镉螯合复合物
3．4．3糖醛酸类生物小分子对镉的螯合
3．4．4东南景天悬浮细胞中的镉螯合复合物
3．5讨论
第四章东南景天中蛋白翻译起始因子SaeIF1功能的研究
4．1引言
4．2实验材料与试剂
4．2．1植物材料
4．2．2菌株和载体
4．2．3常用试剂与培养基
4．3实验方法
4．3．1东南景天的培养及镉处理
4．3．2文库筛选及载体的构建
4．3．3烟草原生质体制备和转化
4．3．4酵母的遗传转化及对镉的胁迫应答
4．3．5拟南芥的遗传转化及对镉的胁迫应答
4．3．6荧光定量PCR
4．3．7总蛋白质的提取及浓度测定
4．3．8免疫印迹实验
4．3．9东南景天蛋白质组的测定
4．4实验结果
4．4．1SaeIF1基因的筛选
4．4．2SaeIF1蛋白的亚细胞定位
4．4．3异源表达SaeIF1对酵母细胞耐受和富集镉的作用
4．4．4过量表达SaeIF1对拟南芥耐受和富集镉的作用
4．4．5东南景天SaeIF1基因和蛋白的表达分析
4．4．6超积累型东南景天高表达的蛋白分析
4．5讨论
5．1引言
5．2实验材料与试剂
5．2．1植物材料
5．2．2菌株和载体
5．2．3常用试剂与培养基
5．3实验方法
5．3．1amiRNA拟南芥文库的筛选
5．3．2amiRNA载体的构建
5．3．3CRISPR载体的构建
5．3．4拟南芥的遗传转化
5．3．5拟南芥的杂交
5．3．6荧光定量PCR
5．4实验结果
5．4．1amiRNA拟南芥文库筛选的结果
5．4．2erf34／35双突变体和cbf1／2／3三突变体表型分析
5．4．3转录因子ERF34和ERF35靶基因的鉴定
5．4．4东南景天中SaERF34和SaERF35基因的序列分析
5．5讨论
结论
本论文的主要创新点
参考文献
附录
博士期间发表的论文
致谢