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第一章绪论
1．1基因组的DSBs及其修复
1．1．1基因组的DSBs
1．1．2基因组双链断裂的修复方式
1．2CRISPR-Cas9结合NHEJ介导基因删除
1．2．1CRISPR-Cas9简介
1．2．2CRISPR-Cas9结合NHEJ介导基因删除
1．3两种对基因组随机位点造成致死损伤的方式
1．3．1常压室温等离子体诱变(ARTP)
1．3．2喹诺酮类药物
1．4 T4 DNA连接酶
1．5PHB简介
1．6本论文的研究内容与意义
2．1实验材料
2．1．1本实验所用的菌株和质粒
2．1．2本实验所用到的引物
2．1．3分子生物学实验常用酶
2．1．4本论文中所使用试剂盒
2．1．5常用生化试剂与药品
2．1．6本实验所用抗生素以及其它药品试剂的配方
2．1．7实验所用到的仪器和设备
2．1．8培养基与主要试剂
2．2实验方法
2．2．1菌种和核酸片段的保藏方法
2．2．2细茴基因组DNA的提取
2．2．3质粒DNA提取
2．2．4PCR扩增反应
2．2．5PCR产物纯化回收
2．2．6琼脂糖凝胶产物的纯化
2．2．7限制性内切酶酶切体系和方法
2．2．8体外连接目的片段和载体
2．2．9体外组装方法
2．2．10大肠杆菌常规转化(化学转化法)
2．2．11重组大肠杆菌生产PHB的发酵方法
2．2．13ARTP诱变菌株的方法
第三章结果与讨论
3．1 T4 DNA连接酶在体内修复外源质粒DSB的功能验证
3．1．1T4 DNA连接酶表达质粒的构建
3．1．2酶切质粒的线性片段验证
3．1．3 T4 DNA连接酶胞内环化外源线性DNA片段的功能验证及效率比较
3．2T4 DNA连接酶修复细胞内基因组DSBs的功能验证
3．2．1在大肠杆菌基因组特定位点产生DSB及快速检测位点突变的策略
3．2．2T4 DNA连接酶修复大肠杆菌基因组DSB的功能验证
3．2．3T4 DNA连接酶修复基因组I)SB过程中造成缺失突变的研究
3．2．4 Gam蛋白调控T4 DNA连接奠在DSB位点造成突变的缺失长度
3．3T4 DNA连接酶介导的体内DNA修复提高了存活耦联的诱变效率
3．3．1T4 DNA连接酶能提高多种原核细胞在ARTP下的存活率
3．3．2T4 DNA连接冀介导的体内DNA修复提高了获得环丙沙星抗性的机会
3．3．3T4 DNA连接酶介导的体内DSBs修复提高存活偶联诱变的功能性验证
全文总结
参考文献
致谢