儿童干扰素刺激基因表达检测方法建立及其在儿童风湿免疫性疾病中的应用
本文从以下几个方面进行论述: 第一部分 目的:建立儿童干扰素刺激基因(ISGs)表达检测方法，确立参考值范围，并初步探讨其在Ⅰ型干扰素病中的应用价值。 方法:取健康儿童外周血28份提取RNA并逆转录为cDNA，将得到的cDNA进行混合，然后用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)的方法分别检测每个样本IFIT1、IFI27、IFI44L、ISG15、SIGLEC1、RSAD2的相对表达量，将6个ISGs的中位数作为该样本的干扰素评分(IS)，大于健康儿童Mean+2SD的IS结果判断为异常。进一步对基因确诊以及临床疑似的Ⅰ型干扰素病患者进行检测以评估该方法在Ⅰ型干扰素病的筛查、诊断以及疾病监测中的应用价值。 结果:健康儿童IS均值为1.046，标准差0.755，IS无性别差异，IS截断值为2.556。19例Ⅰ型干扰素病患者组IS异常的有16例(84.2％)，IS均值为27.099。与对照组相比干扰素疾病患者组IS明显升高(P＜0.005)。该检测方法的准确度为91.49％，精密度为7.47％，灵敏度为84.21％，特异度为96.43％。本研究中通过该方法筛查出了1例阳性Ⅰ型干扰素病患者。在疾病的动态监测中，8名Ⅰ型干扰素病患儿在接受JAK抑制剂治疗后临床症状部分好转，其中有6名患儿出现了IS的下降，但炎症指标无明显改善。 结论:本研究通过ISGs表达的检测并计算IS初步建立了儿童IS的参考值范围，并为临床筛查以及动态监测Ⅰ型干扰素疾病变化提供了新的可靠的手段。 第二部分: 目的:探讨ISGs检测方法在儿童常见风湿性疾病中的应用价值以及部分疾病特异性ISGs的探索。 方法:收集儿童系统性红斑狼疮(cSLE)、幼年型皮肌炎(JDM)，儿童原发性干燥综合征(pSS)、儿童系统性硬化症(JSSc)和病毒感染患儿的临床资料，对各患儿ISGs的相对表达量进行检测并计算IS，将得到的结果与各患者对应的临床指标和疾病活动度评分等进行比较和关联性分析，并对各疾病ISGs的表达差异进行横向比较。最后用转录组学的方法对cSLE、Ⅰ型干扰素病和病毒感染患者所表达的特异性ISGs进行分析比较。 结果:共纳入60名cSLE患儿，IS的总阳性率为96.7％(58/60)，IS平均值为25.68。IS高低与cSLE患儿血沉(ESR)、补体C3和C4、抗双链DNA(dsDNA)、自身抗体个数均存在相关性，R2为0.082-0.425，且直接与SLEDAI-2K呈正相关(R2=0.309，p＜0.0001)。IS高低与患儿性别、受累系统以及受累系统的多少无关，与合并巨细胞病毒(CMV)感染有关(p=0.0239)。IS变化不能反映疾病的动态变化(p=0.4394)。但IS对疾病活动状态的评估优于抗dsDNA、ESR、补体C3和C4，曲线下面积(AUC)分别为0.7749，0.7094，0.6991，0.7065，0.6124。共纳入JDM患儿42名，IS总阳性率为73.8％(31/42)，IS均值为18.33，IS的高低与儿童肌炎评估量表(CMAS)、8组肌群的标准化对抗型徒手肌力检查评分(MMT8)、疾病活动评分(DAS)和医师整体评分(PGA)均存在相关性，且相关性均优于肌酸激酶(CK)。IS对疾病的活动状态的判断优于CK，AUC分别为0.920和0.681。纳入pSS患儿18名，IS总阳性率为83.3％(15/18)，IS均值为17.23。IS高低只与ESR相关，而与免疫球蛋白G、类风湿因子等无相关性。共纳入JSSc患儿17名，IS阳性率为52.9％(9/17)，IS均值为2.95。IS高低与系统受累、抗Scl-70等无关。共纳入病毒感染患儿16名，IS总阳性率为100％(16/16)，IS均值为96.761。各类疾病IS比较结果显示病毒感染组明显高于其他组，Ⅰ型干扰素病组高于JDM和pSS以及JSSc组，与cSLE组无显著差异。cSLE、pSS和JDM组IS无显著差异。全血转录组结果表明Ⅰ型干扰素病、cSLE和病毒感染存在Ⅰ型干扰素通路基因的差异性上调。 结论:ISGs在儿童常见风湿性疾病中均存在不同程度的表达升高，与cSLE、JDM的疾病活动相关，且对疾病活动状态的评价优于部分临床常用评价指标。Ⅰ型干扰素病、cSLE和病毒感染存在ISGs的差异表达。
风湿免疫性疾病;儿童患者;临床诊断;干扰素刺激基因;基因表达检测
中国医学科学院;清华大学医学部;北京协和医学院
硕士
儿科学
宋红梅
2022
中文
R725.9;R593.21
2022-10-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）