红景天苷通过JAK2/STAT3信号通路缓解哮喘气道炎症的作用机制研究
目的:观察红景天苷(Salidroside，SAL)对卵清蛋白(Ovalbumin，OVA)诱导的急性哮喘小鼠气道炎症反应的影响，并探究SAL与Janus激酶2(JAK2)/信号转导与转录激活子3(STAT3)信号通路之间的关系。 方法:将50只6-8周龄，体重18-22g，清洁级，雌性BABL/c实验小鼠随机分成5组:正常对照组（Control组），哮喘模型组（OVA组）、红景天苷低剂量组（SAL15组）、红景天苷高剂量组（SAL30组）和地塞米松组（DEX组），每组10只。本实验将使用OVA致敏和激发的方法构建急性哮喘小鼠模型。除正常对照组外各组小鼠用现配制的200ul生理盐水(含OVA20ug+氢氧化铝混悬液(Alum)50ul)于第1，7，14天采用腹腔注射的方式给予致敏，Control组予腹腔注射等量的生理盐水200ul;第17天起除Control组外小鼠均被置于密闭空间内予5％OVA溶液10ml雾化吸入进行激发，Control组10ml生理盐水雾化吸入其他条件均相同，每次30min，持续7天。药物激发期间，SAL15组、SAL30组、DEX组均采用腹腔注射方式分别给予SAL低剂量15mg/kg、SAL高剂量30mg/kg，地塞米松2mg/kg，治疗药物均溶于200ul生理盐水中。Control组及OVA组的小鼠同样腹腔注射200ul生理盐水，于雾化前1小时给药，共7天。在完成最后一次雾化激发24小时后对实验小鼠进行处理，收集肺泡灌洗液(BronchoalveolarLavageFluid，BALF)及肺组织，收集结束后将按照实验计划按部就班的进行:1)BALF中炎性细胞分类及计数的检测;2）采用ELISA法检测相关炎症因子的含量;3）收集的肺组织进行石蜡包埋及切片，后期行HE和Masson染色;4）通过Westernblotting检测JAK2/STAT3信号通路相关蛋白的表达;5）采用组织切片免疫荧光法观察肺组织中p-JAK2及p-STAT3蛋白表达情况。 结果:1)BALF中OVA组炎症总细胞(Totalcell)、嗜酸性粒细胞(Eosinophils，EOS)、中性粒细胞(neutrophil，NEU)及淋巴细胞(lymphocyte，LYM)计数较Control组显著升高，与Control组比较差异有统计学意义（P＜0.05）;经SAL处理后，SAL15、SAL30组炎症细胞计数均降低，随着SAL剂量的增加，Totalcell、EOS、NEU、LYM计数明显下降，予OVA组比较差异显著(P＜0.05);2)ELISA法检测较Control组相比，OVA组IL-4、IL-5、IL-13水平显著升高，差异有统计学意义（P＜0.05），经SAL干预后BALF中IL-4、IL-5、IL-13的表达较OVA组减少，差异有统计学意义（P＜0.05）;3）HE及Masson染色:HE染色Control组未见明显病理变化，OVA组可见气道上皮受损，管腔变窄，气道及血管周围大量炎症细胞渗出，Masson染色OVA组可见大量胶原纤维沉积，杯状细胞及黏液分泌明显增多，SAL15组、SAL30组气道炎症细胞减少，病理形态改变随着SAL剂量的增加减少明显，SAL30组及DEX组改变更为显著;4）Westernblotting检测分析相关蛋白表达:各组JAK2、STAT3蛋白的表达无显著差异，OVA组p-JAK2、p-STAT蛋白的表达较Control组明显升高，差异有统计学意义(P＜0.05)，与OVA组相比，红景天苷和地塞米松治疗组显著抑制了P-JAK2、P-STAT3蛋白表达（P＜0.05）;5）通过免疫荧光法观察到OVA模型组较Control组气道壁及气道平滑肌P-JAK2、P-STAT3蛋白表达明显增多，荧光强度增强;经红景天苷和地塞米松处理后，其抑制了P-JAK2、P-STAT3蛋白表达,荧光强度减弱，不同剂量红景天苷对气道炎症的抑制作用不同，呈剂量依赖性，SAL高浓度组和地塞米松组炎症抑制作用明显。 结论:1.SAL可以抑制OVA诱导的急性哮喘小鼠的气道炎症。2.SAL缓解哮喘小鼠气道炎症的机制可能与JAK2/STAT3信号通路有关。
红景天苷;哮喘;气道炎症;信号通路
延边大学
硕士
儿科学
池永学
2022
中文
R285.5
2022-10-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）