银离子藻酸盐敷料体外抑菌及安全性研究
目的: 建立细菌生物膜(Biofilm,BF)体外静置模型,判断各种细菌的生物膜形成能力,评价银离子藻酸盐敷料体外抑菌效果及体内安全性,为银离子藻酸盐敷料对慢性感染伤口的临床治疗提供可行性依据。 方法: 1、建立细菌生物膜体外模型 甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)、甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)、铜绿假单胞菌和白色念珠菌培养至对数生长期后将各菌液稀释至同一浓度,分别或相互混合培养于96孔板中。24小时后用结晶紫染色法测定各个菌的OD值以判断其生物膜形成能力。 2、银离子藻酸盐敷料体外抑菌效果 用微量肉汤稀释法测定阳性药青霉素、万古霉素、头孢哌酮舒巴坦、两性霉素B的MIC,用琼脂扩散法测定银离子藻酸盐敷料与阳性药的抑菌圈,对比分析银离子藻酸盐敷料抑菌效果。 3、银离子藻酸盐敷料的亚慢性毒性 将28只SD大鼠随机分为银离子藻酸盐敷料浸提液给药组与对照组,给药组大鼠尾静脉注射银离子藻酸盐敷料生理盐水浸提液,每天一次,剂量为10ml/kg;腹腔注射银离子藻酸盐敷料芝麻油浸提液,于第1天、第4天、第7天、第10天、第13天注射,剂量为5ml/kg。每天记录大鼠体重及注射前后的一般表现、中毒反应和死亡情况,14天后对大鼠进行大体解剖,观察测定其临床症状、脏器系数、血常规、血生化、病理及组织学指标。 4、银离子藻酸盐敷料植入后局部反应 将4只SD大鼠随机分为2组进行背部皮下植入测试,T1组:样品与对照品-1(Biatain(@)AlginateAg),动物编号为T1-1与T1-2;T2组:样品与对照品-2(SuprasorbA+Ag-LR),动物编号为T2-1与T2-2。植入4周后处死大鼠,对植入点的皮肤制作病理切片,用苏木精和伊红染色后观察银离子藻酸盐敷料样品植入部位及周围组织的情况并与对照品比较。 结果: 1、细菌生物膜体外成膜能力 MSSA、MRSA、铜绿假单胞菌、白色念珠菌及各混合菌均具有强生物膜形成能力。 2、银离子藻酸盐敷料的抑菌效果 MRSA、铜绿假单胞菌、白色念珠菌对应阳性药的抑菌效果都优于银离子藻酸盐敷料。银离子藻酸盐敷料对铜绿假单胞菌的抑菌圈直径最大,抑菌效果最好,对MRSA抑菌效果次之,对白色念珠菌效果稍差。 3、银离子藻酸盐敷料的亚慢性毒性 银离子藻酸盐敷料浸提液用药组无一动物死亡,各大鼠的一般状况、主要脏器无异常;脏器系数与对照组比较无显著差异;病理检查结果除了肺、肝、肾及卵巢略有轻微病变,其他脏器的组织结构、细胞形态和比例正常;血液指标中RBC、HGB、HCT、MHC、MCHC比对照组有显著改变;血生化中ALB、A/G、TG、ALT、AST、GLB、BUN也较对照组有显著改变。 4、银离子藻酸盐敷料植入后局部反应 4只大鼠24个植入点肉眼观察发现皮肤略隆起,表面无出血结痂,切开皮肤见皮下一米粒大小结节。镜下观察发现皮肤由角质层、颗粒细胞层、棘细胞层、基底细胞层、皮肤附属器和皮下组织构成,表皮有轻度角化,真皮下结缔组织中有一埋植物,埋植物周围纤维组织轻度增生并有轻度充血水肿和炎细胞浸润。其中,6个对照品-1植入位点中有2例炎细胞浸润较明显并见巨噬细胞出现,血管数目略为增多;6个对照品-2植入位点中有3例炎细胞浸润明显并伴有巨噬细胞出现,血管扩张充血、数目增多,2例埋植物中心有坏死和囊腔形成,3例炎症反应略轻,在埋植物中心可见坏死和囊腔形成;12个银离子藻酸盐敷料样品植入位点中有3例炎症反应略为明显,5例可见埋植物中心坏死和囊腔形成。对各样品的炎症反应进行综合评分及统计分析发现对照品-1组、对照品-2组及银离子藻酸盐敷料样品组的炎症反应无明显差异。 结论: 1、MSSA、MRSA、铜绿假单胞菌、白色念珠菌及各混合菌均有强生物膜形成能力,适用于构建体外细菌生物膜模型进行相关研究。 2、银离子藻酸盐敷料对MRSA、铜绿假单胞菌、白色念珠菌具有强的抑菌效果,体内安全性良好,可为其临床安全使用提供参考。
银离子藻酸盐敷料;体外抑菌效果;临床应用;体内安全性
广西医科大学
硕士
药理学
杨斌
2021
中文
R978
2022-04-28(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)