VEGFA基因多态性与HBV相关慢性肝炎、肝硬化和肝癌的遗传易感性研究
目的:通过对血管内皮生长因子A(VascularendothelialgrowthfactorA，VEGFA)基因的rs10434，rs3025040和rs833061三个位点基因多态性的检测，探讨其基因多态性与乙型肝炎病毒（HepatitisBvirus，HBV）感染相关慢性肝炎(ChronichepatitisB，CHB)、肝硬化(Liversoncirrhosis，LC)和肝癌(Hepatocellularcarcinoma，HCC)易感性的相关关系，为疾病的预防、诊断等提供相关的理论依据。 方法:将研究对象分为对照组、HBV相关慢性肝炎组、HBV相关性肝硬化组和HBV相关性肝癌组，制定纳入和排除标准。收集各组研究对象的相关资料和EDTA-2K抗凝全血，对抗凝全血进行DNA提取与纯化后，进行PCR扩增，而后采用Snapshot技术对各研究对象的DNA片段进行VEGFA基因rs10434、rs3025040和rs83361三个位点的基因型检测，并以Sanger测序进行抽样验证，以哈-温平衡定律(Hardy-Weinbergequilibrium，HWE)评估各组研究对象是否来自遗传平衡的群体，推断是否具备群体代表性。根据测序结果计算各位点的基因型和等位基因的分布频率，采用二元Logistic回归分析对年龄和/或性别进行校正后计算比值比(Oddsratio，OR)和95％可信区间(Confiduntialinterval，CI)，进而探讨VEGFA基因三个位点的单核苷酸多态性(Singlenucleotidepolymorphism，SNP)与HBV相关慢性肝炎、肝硬化和肝癌遗传易感性的相关关系。通过SHEsis在线软件构建VEGFA基因rs10434，rs3025040，rs83361三个位点的单倍型，进而分析单倍型与HBV相关慢性肝炎、肝硬化和肝癌遗传易感性的相关关系。 结果: 1.纳入研究对象共659例，其中包括对照组159例，HBV相关慢性肝炎组162例，HBV相关性肝硬化组165例，以及HBV相关性肝癌组173例（后文简称肝炎组、肝硬化组和肝癌组）。经正态性检验分析四个组的年龄属于偏态分布资料，所以各组间年龄的比较采用非参数Kruskal-WallisH检验，结果为H=35.034，P＜0.05，差异有统计学意义。进一步多重比较发现，对照组与肝炎组的年龄差异具有统计学意义（P＜0.05），对照组与肝硬化组、肝癌组的年龄差异无统计学意义（P＞0.05）。对四个组研究对象的性别比较采用R*C列联表x2检验，结果为x2=3.422，P=0.331，各组的性别差异无统计学意义。 2.Snapshot测序分型发现VEGFA基因rs10434位点存在GG、AG和AA三种基因型，rs3025040位点存在CC、CT和TT三种基因型，rs833061位点存在TT、CT和CC三种基因型，sanger测序抽样验证的结果与Snapshot多重测序相符。 3.对照组与各病例组VEGFA基因rs10434、rs3025040和rs833061三个位点的基因型分布频率均符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律(P＞0.05)。三个位点的基因型和等位基因的分布频率在对照组和各病例组的差异无统计学意义(P＞0.05)。 4.对各比较组（对照组vs.肝炎组，对照组vs.肝硬化组，对照组vs.肝癌组）采用二元Logstic回归分析，设置参照，校正性别年龄等混杂因素后，发现VEGFA基因rs10434、rs3025040和rs833061三个位点在基因型模型和等位基因模型下的基因型或等位基因的携带频率在各比较组内的差异无统计学意义（P＞0.05）。 5.按性别分组，对各比较组采用二元Logstic回归分析，设置参照，校正年龄因素后发现，在女性组中，VEGFA基因rs10434位点的AA基因型和A等位基因的携带频率在对照组和肝炎组中的差异具有统计学意义（AA基因型:P=0.030，OR=11.853，95％CI:1.266-110.960;A等位基因:P=0.009，OR=2.805，95％CI:1.297-6.066)，AG基因型、A等位基因的携带频率在对照组和肝硬化组中的差异具有统计学意义(AG基因型:P=0.019，OR=3.423，95％CI:1.227-9.552;A等位基因:P=0.005，OR=3.009，95％CI:1.385-6.538)。而在男性组中，该位点在两种模型下的基因型或等位基因的携带频率在各比较组内的差异无统计学意义（P＞0.05）。无论是男性组还是女性组，VEGFA基因rs3025040和rs833061两个位点在基因型模型和等位基因模型下的基因型或等位基因的携带频率在各比较组内的差异无统计学意义（P＞0.05）。 6.按年龄分组，对各比较组采用二元Logstic回归分析，设置参照，校正性别年龄因素后，发现在＞50岁组中，VEGFA基因rs10434位点的AG基因型的携带频率在对照组和肝癌中的差异具有统计学意义(P=0.046，OR=1.854，95％CI:1.011-3.401)，而在＜50岁组中，该位点在基因型模型和等位基因模型下的基因型或等位基因的携带频率在各比较组内的差异无统计学意义(P＞0.05)。无论是＜50岁组还是＞50岁组，VEGFA基因rs3025040和rs833061两个位点在基因型模型和等位基因模型下的基因型或等位基因的携带频率在各比较组内的差异无统计学意义（P＞0.05）。 7.在各比较组内采用SHEsis在线软件对VEGFA基因rs10434、rs3025040和rs833061三个位点的基因多态性构建单倍型，共构建出六种单倍型(CCA、CCG、CTG、TCA、TCG、TTG)，统计分析发现CCG、CTG和TCG单倍型的分布频率在对照组和肝硬化组中的差异具有统计学意义(CCG∶P=0.037,OR=1.525,95％CI:1.024-2.272;CTG:P=0.047,OR=0.457,95％CI:0.207-1.006;TCG::P=0.023,OR=0.695,95％CI:0.507-0.952),而其余单倍型的分布频率在对照组和病例组的差异均无统计学意义(P＞0.05)。 结论: 1.VEGFA基因rs10434位点的AA基因型、A等位基因可能会增加女性患HBV相关慢性肝炎的风险，AG基因型、A等位基因可能会增加女性患HBV相关性肝硬化的风险，AG基因型可能会增加＞50岁人群患HBV相关性肝癌的风险。 2.VEGFA基因rs3025040和rs833061两个位点的基因多态性与HBV相关慢性肝炎、肝硬化和肝癌的患病风险可能无关。 3.VEGFA基因rs10434、rs3025040和rs833061三个位点构建的单倍型CCG可能会增加HBV相关性肝硬化的患病风险;CTG和TCG两种单倍型可能会降低HBV相关性肝硬化的患病风险。
肝癌;肝硬化;慢性乙型肝炎;血管内皮生长因子;基因多态性
广西医科大学
硕士
临床检验诊断学
秦雪
2021
中文
R512.62;R575.2;R735.7
2022-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）