Bcl-2mRNA反义药物的设计和白血病细胞药物敏感性研究
目的:探讨RNA二级结构预测程序RNAstructure3.5模拟bcl-2 mRNA二级结构对bcl-2 mRNA反义作用靶点选择的影响;观察不同靶点的反义寡核苷酸对白血病细胞株HL60、K562细胞生长活性、bcl-2 mRNA和蛋白水平、细胞凋亡率和药物敏感性的影响;观察并比较不同结构骨架的反义物质—反义肽核酸与反主寡核苷酸对HL60、K562生物学作用的异同;观察不同靶点的反义药物对临床白血病人细胞生物学活性的影响.方法:用RNA二级结构预测程序RNAstructure3.5预测bcl-2 mRNA的二级结构;用程序Blast对选定的序列进行人类基因组相似评估证实序列在人类基因组中具有唯一性;用Quickfold程序评估选定的反义序列出现自我杂交或形成发夹的机率;Melting程序计算DNA/mRNA的理论熔点;用程序Lalign评估序列相互之间形成二聚体的机率;细胞记数观察细胞的生存情况;MTT法测药物的半数抑制率(IC50);用流式细胞仪、形态学观察及凝胶电泳观察细胞凋亡;免疫荧光标记和半定量逆转录PCR观察细胞bco-2蛋白水平和mRNA水平.结论:(1)分别在bcl-2 mRNA翻译起始区和蛋白编码区发现了两个有效的反义作用靶点,针对这两个靶点的反认寡核苷酸能特异性抑制HL60和K562细胞的生长活性、降低bcl-2 mRNA和蛋白水平、促进细胞的凋亡和改善细胞对Vp16、Ara-c、DNR和As<,2>O<,3>敏感性;(2)靶向bcl-2蛋白编码区的反义肽核酸有显著的反义作用,并且其作用持续时间比相同条件下的反义寡核苷酸长;(3)靶向bcl-2 mRNA翻译起始区和蛋白编码区的反义寡核苷酸能增强临床白血病人AL细胞对Vp16、Ara-c、DNR的敏感性和CLL细胞对Ara-c及DNR的敏感性;(4)在bcl-2 mRNA翻译起始区外存在着有效的反义作用靶点.
Bcl-2;药物设计;反义寡核苷酸;反义肽核酸;白血病;凋亡;药物敏感性
暨南大学
博士
内科血液学
张洹
2001
中文
R973;R91
99
2004-04-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）