肝素钠和人血清白蛋白对甲状腺素转运蛋白聚集作用的研究
甲状腺素转运蛋白(Transthyretin，TTR)是一个高度保守的蛋白，分子量约为55kDa，结构为四聚体形式，包含四个同源的单体。它主要是通过肝脏合成后分泌到血浆中进行循环，其主要作用是结合及运输甲状腺素。正常生理条件下TTR蛋白结构稳定，但是在基因突变以及酸性环境等病理条件下发生解聚，会以单体形式存在。TTR单体易聚集成不溶的低聚物，再形成淀粉样纤维在人体的不同器官内沉积，从而导致淀粉样变性病的发生。由此可知，TTR蛋白发生聚集，然后形成不溶的淀粉样物质，会影响正常的生理反应。探究TTR在体外的聚集以及相关药物对其聚集的影响，能够为TTR淀粉样变性病的病理研究和新药研发提供新的启发。 本课题通过基因工程方法构建了pET-28a-TTR、pET-28a-EGFP-TTR两种重组质粒，然后于大肠杆菌原核细胞内进行大量表达并利用Ni柱亲和层析的方法进行纯化，最终得到TTR与EGFP-TTR蛋白。使用ThT测试研究发现TTR蛋白在酸性的病理环境下自主发生聚集。再通过浊度实验与激光共聚焦显微镜成像对EGFP-TTR蛋白进行表征。探究不同蛋白浓度和pH值的条件下TTR聚集的情况。结果表明pH值降低会增加聚集，蛋白浓度越高聚集越强。然后研究肝素钠存在时TTR的聚集，发现酸性条件下低浓度的肝素钠会促进TTR的聚集，而高浓度的肝素钠会抑制它的聚集。最后观察人血清白蛋白(HSA)对TTR聚集的影响，在HSA存在时能够显著的抑制TTR的聚集，避免淀粉样物质的产生。这些研究结果能够为TTR聚集发生机理的进一步研究及淀粉样变性病的治疗奠定基础。
肝素钠;血清白蛋白;甲状腺素转运蛋白;聚集作用;实验药理
北京化工大学
硕士
生物工程
罗施中;叔谋
2021
中文
R965
2021-09-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）