基于CRISPR的多位点组合调控技术的开发及应用
随着人们对细胞代谢途径改造的深入，如何平衡细胞产物产量与细胞生存压力，逐渐成为了在代谢工程领域和合成生物学中不可忽视的问题。本课题对本实验室开发的Lightning gRNA-tRNA-array CRISPR-Cas9(GTR-CRISPR)系统针对组合调控的应用进行优化，该系统能在3天内对酿酒酵母的6个基因进行敲除，同时敲除效率达到63％。为了能同时对酿酒酵母的甲羟戊酸途径中的多个基因进行调控，本课题通过针对gRNA阵列自剪切效率(tRNA)、CRISPR系统靶向范围（dCas9-NG蛋白）以及酿酒酵母多靶点的组装和调控效率（Lightning GTR系统）进行优化，实现对产β-胡萝卜素的酿酒酵母的甲羟戊酸途径的6个基因同时进行不同程度的激活表达和筛选，得到了能够让菌株的β-胡萝卜素产量提高至4倍的基因表达组合。本论文开发的多靶点组合调控方法为合成生物学工具开发以及代谢工程系统改造提供了强有力的理论和技术支持。
基因改造;CRISPR系统;组合调控
北京化工大学
硕士
生物工程
刘子鹤;李建明
2021
中文
Q78
2021-09-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）