CD105对绒毛膜癌裸鼠移植瘤耐药性的影响及机制分析
背景 绒毛膜癌，简称绒癌，足妊娠滋养细胞肿瘤中恶性程度最高的一种，对化疗具有高度敏感性。目前一线的化疗方案包括EMA-CO、APE、FAEV/FAV等。化疗和手术可使本病治愈率维持在90％左右，但仍有部分患者因化疗耐药、不能手术、复发等原因死亡，尤其是耐药患者，死因常为缺乏可行后续治疗方案。滋养细胞肿瘤在我国较常见，北京协和医院妇产科是滋养细胞疾病诊治中心，探索绒癌耐药对于诊治中心而言具有极大意义，通过了解其相关通路，可为耐药患者寻找新的可行治疗方案进而提高患者生存率。CD105作为一种TGF-β受体超家族成员的跨膜糖蛋白在机体组织中具有诸多生物学功能。前期实验已证实在体外细胞实验中，所构建的CD105过表达细胞株比CD105敲减表达细胞株对化疗药物的敏感性更低，且在体外细胞层面上探究了CD105介导绒癌耐药的作用机制，该机制与BMP9/Smads通路相关。 目的 本课题拟在体内实验中验证CD105及其相关蛋白对绒癌耐药性的影响，通过比较野生型绒癌细胞、CD105过表达型绒癌细胞和CD105敲减表达型绒癌细胞在裸鼠巾的成瘤情况，比较各组绒癌裸鼠移植瘤中CD105及相关蛋白表达水平差异，进一步验证和探究CD105对绒癌耐药在体内的影响及其发生发展机制。 方法 1.将野生型绒癌细胞、CD105过表达型绒癌细胞和CD105敲减表达型绒癌细胞悬浮液浓度梯度稀释，讲悬浮液接种在裸鼠颈部皮下探究绒癌移植瘤成瘤最佳浓度，接种最佳浓度后构建三种人绒癌细胞的裸鼠移植瘤动物模型。 2.观察野生型移植瘤、CD105过表达型移植瘤和CD105敲减表达型移植瘤所在裸鼠的状态，记录各类型成瘤情况并根据瘤体大小绘制成瘤曲线。三种类型移植瘤各均分为化疗实验组和空白对照组，各实验组给予甲氨蝶呤单药腹腔注射，对照组予生理盐水，比较实验组和对照组注射后瘤体体积变化差异，计算各组抑瘤率，通过瘤体对化疗药物的敏感程度的差异来反映瘤体的耐药性的差异。 3.将各组中模型裸鼠二氧化碳处死后取其血清检测游离CD105浓度。取移植瘤行包埋切片，通过免疫组化及凝胶蛋白电泳分析各组CD105与BMP9/Smads信号通路相关蛋白表达水平。 结果 绒癌细胞裸鼠移植瘤成瘤最佳浓度为107/ml，以该浓度接种后三组模型中裸鼠成瘤率皆为100％。野生型移植瘤生长速度均慢于CD105过表达型而快于CD105敲减表达型。甲氨蝶呤给药后过表达型移植瘤对化疗的耐药性更高。过表达型裸鼠血清CD105浓度高于野生型和敲减表达型。野生型移植瘤中CD105、BMP9表达水平均低于过表达型而高于敲减表达型。 结论 在裸鼠移植瘤模型中证明了移植瘤体中CD105、BMP9的表达水平、血清中CD105表达水平与移植瘤的耐药程度具有一致性，为后续耐药绒癌裸鼠移植瘤的研究奠定了实验动物建模基础。
绒毛膜癌;CD105;动物模型;化疗耐药
中国医学科学院北京协和医学院
博士
临床医学
向阳
2020
中文
R737.33
2021-06-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）