NDUFA4在胰腺癌中生物学行为及机制研究
目的:胰腺癌因诊治困难、预后极差即将成为公众极大的健康负担。免疫治疗等新疗法在胰腺癌治疗中效果并不理想，而一线化疗方案耐药是目前亟需解决的核心问题。因此，对胰腺癌化疗耐药机制进行研究，并尝试寻找新的治疗位点将具有重大意义。课题组前期通过高通量转录组测序筛选出多个在敏感组和耐药组间存在表达差异的基因，提示其与化疗耐药相关。结合既往研究，推测其中表达量显著升高的NDUFA4基因可能对胰腺癌细胞的生物学行为及化疗敏感程度产生影响。NDUFA4已知可以通过Bcl-2和细胞色素C介导的信号途径激活生长因子，抑制神经元凋亡，促进神经元生长;在多种肿瘤细胞中亦被证实存在调控作用，但其中机制未明，有待进一步探索。本研究拟通过一系列实验探究体外条件下抑制NDUFA4的表达是否对胰腺癌细胞的增殖、凋亡、化疗敏感度产生影响，可作为对该基因的初步探索;若存在影响，则进一步探讨NDUFA4调控化疗耐药可能的作用机制，评估其作为潜在诊断标志物或治疗靶点的可能。 方法:以Westernblot检测NDUFA4在不同胰腺癌细胞株中的表达程度，并筛选出表达适中的工具细胞株;转染siNDUFA4沉默工具细胞株，以实时定量PCR检测转染效率;构建稳转细胞株，采用CCK-8法及流式细胞术检测下调NDUFA4表达后细胞增殖、凋亡等行为的变化;不同浓度吉西他滨处理稳转细胞株，CCK-8法检测化疗敏感度差异;吉西他滨处理工具细胞株，提取总mRNA，实时定量PCR检测吉西他滨能否诱导NDUFA4表达差异。 结果:NDUFA4在吉西他滨耐药组细胞中高表达，在不同种类的胰腺癌细胞株内存在表达差异;预测下调NDUFA4的表达将使稳转细胞株测定的OD值小于对照组OD值，证明下调NDUFA4可以抑制胰腺癌细胞的增殖;流式细胞作图分析，预测下调NDUFA4可以抑制胰腺癌细胞的凋亡;预测吉西他滨处理后计算稳转细胞株抑制率大于对照组抑制率，证明下调NDUFA4可以提高胰腺癌细胞对吉西他滨的化疗敏感程度;预测吉西他滨处理后的工具细胞株NDUFA4-mRNA量高于对照组，证明吉西他滨可以诱导NDUFA4表达上调。 结论:NDUFA4基因在不同胰腺癌耐药细胞株中存在差异表达，下调NDUFA4基因表达对胰腺癌细胞的增殖有抑制作用，并促进细胞凋亡过程。下调NDUFA4提高胰腺癌细胞的化疗敏感性;吉西他滨可以诱导NDUFA4表达上调。说明NDUFA4是胰腺癌化疗耐药潜在的影响因素之一，值得进一步研究。
胰腺癌;化疗耐药;NDUFA4;生物学行为;治疗靶点
中国医学科学院北京协和医学院
博士
外科学
赵玉沛
2020
中文
R735.9
2021-06-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）