基于高通量测序的阵发性睡眠性血红蛋白尿症致病相关基因探究
目的 1.探究髓系肿瘤相关基因在阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)中的突变情况，并探究PIGA突变细胞群克隆扩增的机制。 2.从基因突变的角度探索PNH患者血栓的发生机制。 方法 对41例确诊PNH的患者，采集基本信息及临床检测结果，收集患者血液标本进行全外显子测序，并对其中的6例分选出CD59阴性和阳性细胞分别测序。根据测序结果: 1.关注文献报道的178个常见髓系肿瘤相关基因，分析这些基因在PNH样本中的突变情况、与临床指标的相关性，及在CD59阴性和阳性细胞群中的分布。 2.分析血栓相关基因在样本中的突变情况，寻找发生血栓的患者与未发生的患者在基因突变上的差异，并比较血栓相关突变在两组细胞间的异同。 结果 1.每个患者携带的平均突变数为3.85个。除PIGA外，髓系肿瘤相关基因的突变情况在CD59-和CD59+两群细胞中均无显著性差异。除PIGA外最常见的突变基因有MAP3K4和CSMD1(12.5％)。RUNX1T1突变与更大的克隆、更高的非结合胆红素和更低的血红蛋白水平相关。携带再障中不良预后相关基因(DNMT3A、RUNX1、JAK2、JAK3、CSMD1)突变的比例随PNH克隆的增高呈逐步降低的趋势。6例分选的PNH患者均检出了可能与克隆扩增相关的基因突变，且这些突变在CD59-细胞群比CD59+细胞群更多见。这说明PNH克隆中可能存在新发的导致其增殖优势的获得性突变。 2.41例PNH患者中，共13例存在血栓，其中4例为多发血栓。常见的血栓部位包括冠状动脉、腹腔静脉血栓和下肢深静脉。常见的与血栓疾病相关的基因突变(因子VLeiden突变、抗凝血酶缺乏、蛋白S和蛋白C缺陷以及凝血酶原基因突变)在本组患者中罕见。比较血栓组和非血栓组，共发现55个涉及血栓发生的基因突变在血栓组中显著高于无血栓组，涉及信号传导、转录调控、运输通道、免疫反应、泛素化、钙离子结合、代谢等多种功能。这些突变基因在同一患者分选后的CD59阳性和阴性两组细胞中不存在差异。进一步分析突变与不同血栓部位的关联发现，SRRD突变与腹部血栓显著相关，EGR4突变与心梗显著相关。在合并血栓的患者中，血栓相关基因突变的个数与患者的克隆大小负相关。 结论 1.PNH患者存在髓系肿瘤相关基因突变。PNH克隆越大，AA中预后不良相关基因的突变率越低。与克隆扩增相关的基因突变在CD59-细胞中比CD59+细胞中更多见，可能是PNH克隆扩增的原因之一。 2.PNH中存在一些与血栓相关的候选基因在血栓组有更高的突变率，但在阴性和阳性细胞中的突变情况无差异。SRRD和EGR4突变可能分别与腹部血栓、心梗相关。小PNH克隆的血栓患者存在更多的血栓相关基因突变，可能是小克隆患者出现血栓的因素之一。
阵发性睡眠性血红蛋白尿;PIGA基因;高通量测序;全外显子测序;克隆扩增
中国医学科学院北京协和医学院
博士
临床医学
韩冰
2020
中文
R696.2
2021-06-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）