FXR--胆汁酸介导的抗结核药物肝毒性靶向代谢组学研究及机制初步探讨
目的： 通过研究小鼠给抗结核药物引起肝毒性的胆汁酸谱变化，探讨法尼醇X受体(Famesoid X receptor，FXR)-胆汁酸介导的抗结核药物肝毒性的可能机制，为临床合理使用抗结核药物及预防肝损伤提供依据。 方法： 1.靶向代谢组学：建立小鼠血清中19种胆汁酸浓度的LC-MS/MS检测方法，采用岛津LC-30A液相系统串联AB SCIEX QUAD5500质谱仪，CORTECS UPLC⑩HSS T3(2.l×100mm，1.6μm)色谱柱，以0.1％甲酸水（含6mM乙酸铵）为A相，95％乙腈为B相进行梯度洗脱，质谱使用电喷雾离子源(ESI)，多反应监测(MRM)模式，对小鼠血清中的胆汁酸谱进行测定; 2.动物肝损伤模型分组及化学干预：野生型小鼠（C57BL/6小鼠）随机分成5组（每组6只）：空白对照组(0.5％CMC-Na)、Rifampin组(RIF，120mg·kg-1)、Isoniazid组(INH,60mg·kg-1)、Pyrazinamide组(PZA,300mg·kg-1)、HRZ组(120mg·kg-1RIF+60mg·kg-1INH+300mg·kg-1PZA)，收集小鼠血清及肝组织;并采用FXR敲除小鼠（FXR-/-小鼠）及奥贝胆酸(Obeticholic acid，OCA)干预措施，观察C57BL/6、FXR-/-小鼠（每组6只）给予HRZ、HRZ+OCA后代谢物及组织损伤变化; 3.肝损伤指标检测：小鼠血清检测生化指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)及总胆酸(TBA)，观察肝功能变化;取小鼠肝脏进行HE染色，观察肝组织状态变化; 4.基因及蛋白表达：通过RT-qPCR检测小鼠肝组织FXR、小分子伴侣(Small heterodiner partner，SHP)、胆固醇7α-羟化酶(Cholesterol7α-hydroxylase，CYP7A1)基因表达水平，western blot检测小鼠肝组织FXR蛋白表达水平; 结果： 1.建立了小鼠血清中19种胆汁酸浓度的LC-MS/MS检测方法，选取的高浓度胆汁酸4～4000ng·mL-1低浓度胆汁酸0.4～400ng·mL-1的线性范围良好，批内批间精密度RSD值均小于15％，且在室温放置6h、进样器放置24h及-80℃反复冻融3次考察条件下稳定，符合样本检测要求; 2.给药后，肝组织切片显示各个给药组均有不同程度的肝损伤;ALT和AST及TBA在INH、RIF及HRZ组均显著升高(P＜0.05)，而PZA组升高相对较缓，其中RIF组胆汁酸升高最明显(P＜0.01)。8种胆汁酸有显著变化，其中CA在给药组中均显著升高(P＜0.05)，野生型小鼠及临床患者在给予抗结核药物联合治疗后，CA浓度与ALT及AST有一定的相关性; 3.FXR-/-小鼠显示给药后ALT及AST较野生型升高减缓，胆汁酸升高幅度也变小;野生型小鼠显示给药后FXR、SHP表达受到抑制，CYP7A1表达升高;联合OCA治疗后，相对于HRZ组，ALT、AST以及胆汁酸更趋于正常水平，同时对FXR、SHP、CYP7A1的表达有部分逆转作用。 结论： 1.抗结核药物诱导的肝毒性与胆汁酸代谢有关，CA变化最显著且其变化与ALT及AST有一定的相关性;2.FXR-胆汁酸是抗结核药物诱导的肝毒性可能的机制之一，OCA可部分逆转抗结核药物诱导的肝毒性。
抗结核药物;肝毒性;胆汁酸谱;代谢组学
苏州大学
硕士
药剂学
缪丽燕
2020
中文
R978.3
2021-04-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）