冬凌草甲素调控急性肝损所致花生四烯酸类CYP450酶代谢的机制研究
目的： 脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)能刺激巨噬细胞分泌多种促炎介质，引发炎症反应。肝脏发生炎症时，花生四烯酸(arachidonic acid，AA)及其衍生物类二十烷酸代谢异常，其中经由CYP（ω-羟化酶代谢的类二十烷酸与炎症密切相关。冬凌草甲素是中草药冬凌草的主要活性成分，其抗炎活性受到广泛的关注。本课题组前期研究发现冬凌草甲素能显著增加细胞转录组中(ω-羟化酶CYP4F11的表达，且能同时上调肝X受体α(liver X receptorα，LXRα)。LXRα作为连接炎症和脂质代谢的关键信号节点，能抑制LPS诱导的炎症，并对脂质代谢有调节作用。已有研究对冬凌草甲素的抗炎机制进行了探索，但冬凌草甲素影响AA代谢与炎症调控机制尚未阐释清楚。由此，本课题旨在阐明冬凌草甲素通过影响LXRα对CYP4F11的调控通路，调节AA的氧化脂质代谢物及相应机制，从新的视角为肝脏炎症的临床治疗提供理论依据。 方法： 1.使用LPS诱导THP-1细胞构建体外炎症模型，考察不同浓度冬凌草甲素体外抗炎作用。 2。使用腹腔注射LPS/D-GalN构建小鼠急性肝损伤模型，考察冬凌草甲素对急性肝损伤的保护作用。 3.考察冬凌草甲素对LXR表达的影响，并通过联用LXR的激动剂GW3965处理LPS诱导的THP-1细胞，考察GW3965对冬凌草甲素抗炎作用的影响。 4.通过双荧光素酶报告基因等实验，考察LXRα对CYP4F11的调控作用，并探讨冬凌草甲素对LXRα-CYP4F11通路的影响。 5.通过慢病毒转染构建稳定过表达CYP4F11的THP-1细胞株，考察CYP4F11对LPS诱导后THP-1细胞炎症因子和氧化脂质的影响。 结果与结论： 1.5μM和10μM的冬凌草甲素可显著降低THP-1细胞炎症因子TNFα、IL-6和IL-1β，且对-FNFα和IL-6的抑制效率显著高于IL-1β。结果表明，冬凌草甲素对LPS诱导的THP-1细胞体外炎症模型具有抗炎作用。 2.5 mg/kg和10 mg/kg的冬凌草甲素给药3天后，能降低LPS/D-GalN诱导小鼠的肝损伤以及血清ALT和AST，并降低肝脏炎症因子的mRNA水平。结果表明，冬凌草甲素对LPS/D-GalN诱发的急性肝损伤具有保护作用。 3.冬凌草甲素可诱导HepG2细胞LXRα蛋白表达，并能逆转急性肝损伤小鼠肝脏中LXRα的降低。GW3965和冬凌草甲素联用后对LXRα有协同诱导的作用，并对LPS诱导的THP-1细胞炎症有协同抗炎效果。结果表明，冬凌草甲素可能通过诱导LXRα发挥抗炎作用。 4.LXRα可作用于CYP4F11启动子区反应元件LXRE，在转录水平调控CYP4F11的表达，敲低LXRα后冬凌草甲素对CYP4F11的诱导作用明显降低。结果表明，冬凌草甲素可通过激活LXRα增加CYP4F11的表达。 5.过表达CYP4F11显著降低THP-1细胞TNFα水平。HPLC-MS/MS对THP-1细胞中47种氧化脂质绝对定量，CYP4F11组有6种氧化脂质发生明显改变，其中促炎介质LTB4显著降低而抗炎介质17-HDHA显著增加，提示CYP4F11可能通过消除LTB4和增加17-HDHA来抑制LPS诱导的TNFα分泌。
冬凌草甲素;肝脏炎症;花生四烯酸;细胞色素P450;代谢组学;抗炎作用
南方医科大学
博士
药剂学
唐斓
2020
中文
R282.71;R285.5
2021-03-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）