NOVA1在脂肪间充质干细胞成脂分化过程中的转录激活及其作用研究
研究背景: RNA结合蛋白Nova1(neuro-oncological ventral antigen 1)是神经特异性剪接因子。随着研究的深入，人们发现Nova1对肿瘤预后、能量代谢也有影响，并在脂肪组织也具有较高的表达。我们的前期研究发现，脂肪来源的间充质干细胞(Adipose Tissue-Derived stem cells，ADSCs)成脂分化的过程中NOVA1基因表达升高，敲减NOVA1能够抑制脂肪分化。本研究将进一步探讨在ADSCs成脂分化过程中NOVA1的激活机制及其促进脂肪分化的机制。 研究目的: 1.探讨脂肪特异转录因子对NOVA1的转录调控作用。 2.发现Nova1调控成脂分化的靶分子。 研究方法和结果: 1.脂肪特异转录因子对NOVA1的转录调控作用。 方法:双萤光报告检测脂肪特异转录因子对NOVA1启动子的转录调控作用，染色质免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation，ChIP)检测ADSCs中PPARγ在NOVA1启动子的富集，实时定量PCR检测在ADSCs中过表达或激活PPARγ对NOVA1表达的调控。 结果:PPARγ:RXRα转录因子复合物通过识别PPARγ应答元件(Peroxisome Prolifertors Responsive Element，PPRE)转录激活NOVA1启动子;PPARγ在NOVA1启动子区PPRE附近有显著富集;激活或过表达PPARγ后NOVA1的表达升高，PPARγ拮抗剂和抑制态PPARγ能够逆转NOVA1的表达升高。 2.Nova1调控脂肪分化的靶分子。 方法:全转录组表达谱芯片、生物信息学分析和实时定量PCR筛选出Nova1调控的脂肪特异基因;敲减靶基因并成脂诱导，油红O和实时定量PCR检测对脂肪分化的影响;敲减NOVA1的基础上过表达靶基因，成脂诱导后油红O和实时定量PCR检测对脂肪分化的影响。 结果:Nova1能影响PPARγ下游基因ACSL1、CD36、FABP4、FASN、PLIN1的表达;敲减CD36、FASN、PLIN1都能抑制脂肪分化;过表达FASN或PLIN1都能够部分挽救敲减NOVA1对脂肪分化抑制作用。 研究结论: 1.PPARγ:RXRα转录因子复合物促进NOVA1基因的转录。 2.Nova1通过影响FASN、PLIN1基因的表达调控ADSCs成脂分化。
脂肪间充质干细胞;成脂分化;NOVA1蛋白;转录调控;脂肪分化
中国医学科学院北京协和医学院
博士
生物化学与分子生物学
肖苒
2019
中文
R329.2
2020-06-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）