非活化富血小板血浆对兔背部预构皮瓣再血管化的研究
背景: 预构皮瓣(Prefabricated flap)是将知名血管移植到随意皮瓣下，或将游离皮肤移植物移植到筋膜、网膜和其他含有血管和丰富血液供应的组织中，使其成为轴型皮瓣，从而主动增加皮瓣血流量，以实现应用新的血供系统供应皮瓣的目的，为修复重建组织器官缺损提供一种新的选择。预制皮瓣的核心问题是重建血运，血运重建不足极易导致预构皮瓣坏死。因此很多学者希望通过施加一些干预手段，促进预构皮瓣的血运重建，提高其成活率。本研究通过提取兔自体非活化富血小板血浆(Platelet-rich plasma,PRP)，并于不同时间将其注射到兔背部预构皮瓣中，探讨局部应用非活化富血小板血浆对预构皮瓣存活的影响，为PRP的临床应用提供理论依据。 研究目的: 建立兔背部预构皮瓣动物模型，并摸索利用氧化铅混悬液灌注方法进行微血管显影的最佳浓度;探讨非活化PRP促进预构皮瓣血管新生、提高皮瓣存活面积的可行性。并比较不同时间注射非活化PRP在促进预构皮瓣存活作用上的差异。 研究方法: 以50只健康雄性新西兰大白兔为研究对象。首先通过两期手术构建2只以兔胸背血管束为蒂的预构皮瓣模型。分别于第一期术后7天和14天取部分皮瓣组织，通过HE染色结果确定第二期手术时间。据此构建18只兔背部预构皮瓣动物模型，根据灌注的氧化铅浓度不同分成9组，每组2只，分别经主动脉注入60％、50％、40％、37％、33％、30％、27％、23％和20％九个不同浓度的氧化铅混悬液，X光摄像观察大体标本及预构皮瓣的微血管显影效果，确定氧化铅最佳微血管显影浓度。将剩余30只兔子背部两侧构建的预构皮瓣随机分为实验侧和对照侧，共60侧。实验侧在胸背血管束周围注射自体非活化PRP，对照侧注射相同量生理盐水。按照第一期手术前(A组)、术中(B组)、术后(C组)这三个不同时间段注射非活化PRP，将30只家兔分为3组，每组10只。采用组织学、免疫组化观察、微血管密度测定和氧化铅血管造影等方法，比较不同时间注射非活化PRP的三组家兔预构皮瓣成活率及再血管化的差异。 研究结果 预构皮瓣构建过程中，通过HE染色观察到第一期术后两周可见较多微血管管腔形成，血运重建基本完成，此时可行第二期手术。行氧化铅混悬液灌注显影时，在60％、50％浓度下三级动脉无法显影，40％、37％浓度下三级动脉显影不清晰，33％、30％浓度下可获得清晰的三级动脉显影，其中33％浓度下造影效果最佳，而浓度低于30％时三级动脉显影模糊。 与对照侧相比，非活化PRP注射侧预构皮瓣成活率、微血管密度以及VEGF、VEGPR2表达在A组和B组中均明显提高(p＜0.05)。PRP治疗侧VEGFR2阳性细胞数A组提高了2.48倍，B组提高了2.62倍，相应的VEGF浓度同样显著提升(p＜0.05);通过CD34阳性染色的微血管计数，发现PRP处理侧A组的微血管密度提高了4倍，B组显著增加了5倍。第二期术后7天肉眼观察皮瓣外观，实验侧B组皮瓣存活率为97±2％，A组88±5.5％。C组的实验侧与对照侧相比各项指标均无显著性差异(p＞0.05)。 研究结论 本研究分两期手术成功建立了以兔胸背血管束为蒂的预构皮瓣模型。利用浓度为33％的氧化铅混悬液进行血管造影，可以清晰地显示皮瓣微血管情况。自体非活化PRP可以促进预构皮瓣的存活，术前和术中注射均可显著提高预构皮瓣的存活率，尤其是术中注射效果更佳。本研究为临床实践中获得更大面积的预构轴型皮瓣提供了理论指导。
预构皮瓣;非活化富血小板血浆;氧化铅;微血管造影;再血管化
中国医学科学院北京协和医学院
博士
外科学
范金财
2019
中文
R622.4
2020-06-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）