长链非编码RNA在肢端雀斑痣样恶性黑素瘤的表达谱分析及长链非编码RNA linc37877功能的初步研究
皮肤恶性黑素瘤(cutaneous malignant melanoma, CMM)是一种来源于黑素细胞的恶性肿瘤。在世界范围内，皮肤黑色素瘤的发病率不断上升。其中，肢端雀斑样黑素瘤(Acral Lentiginous Melanoma，ALM)在白种人中少见，但在亚洲人中发病率较高。尽管黑素瘤的诊断及治疗方法快速发展，但是5年生存率并没有明显提高。所以，更好的了解肿瘤发生发展的分子机制仍具有重要的意义。长链非编码RNA(long non-coding RNA，lncRNA)是一种长度大于200个核苷酸且不具备编码蛋白能力的转录本。目前已发现多种lncRNA与黑素瘤的发生发展相关。本课题组通过基因芯片杂交的方法进行ALM表达谱分析，寻找差异表达的lncRNA，构建lncRNA-mRNA共表达网络。我们发现，linc37877在肿瘤组织及黑素瘤细胞系中均高表达。我们推测，linc37877在黑素瘤中可能作为癌基因对肿瘤的发生发展起到促进的作用。 第一部分长链非编码RNA在肢端雀斑痣样黑素瘤的表达谱分析 目的:建立肢端雀斑痣样黑素瘤差异表达lncRNA及mRNA表达谱，获得差异表达mRNA的分子功能、生物学过程及相关疾病通路信息。 方法:应用人类lncRNA芯片杂交技术对6对肢端雀斑痣样黑素瘤患者的肿瘤组织及癌旁组织样本进行差异表达的lncRNA和mRNA筛选。对差异表达的mRNA进行GO分析及KEGG分析，获得相关分子学信息及疾病通路信息。挑取差异表达的5条lncRNA进行RT-qPCR实验验证，构建lncRNA-mRNA共表达网络。 结果:通过lncRNA芯片杂交，共获得4490条差异表达的lncRNA和3915条差异表达的mRNA。差异表达的mRNA主要影响的生物学过程为色素的产生、黑素细胞分化、黑素代谢物生物合成、细胞链接和细胞粘附等，主要影响的细胞成分为黑色素体膜、色素颗粒和黑色素小体、细胞间连接等，分子功能主要影响通道活性、细胞间粘附、钙粘蛋臼结合等。通路主要涉及:神经鞘糖脂生物合成-ganglio系列，肿瘤转录失调，Toll样受体信号通路和黑色素生成、催产素信号通路、肌动蛋白细胞骨架和HIPO信号通路的调控等。 结论:构建了肢端雀斑痣样黑素瘤的lncRNA、mRNA表达谱。为后续研究提供了数据来源。 第二部分linc37877对黑素瘤细胞A875生物学行为的影响及机制初探 目的:研究linc37877对黑素瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭和迁移能力的影响 方法:首先在原代黑素细胞及4种黑素瘤细胞株(A375、A875、MV3、SK-MEL-28)中通过RT-qPCR实验验证linc37877的差异表达。采用RNA荧光原位杂交及核质分离实验明确linc37877的细胞定位。联合应用ASO技术及siRNA技术有效干扰黑素瘤细胞株中linc37877的表达，并评估干扰效率。CCK8法及EdU法检测linc37877对黑素瘤细胞增殖的影响，流式凋亡实验检测linc37877对黑素瘤细胞凋亡的影响，划痕实验、Transwell实验检测linc37877对黑素瘤细胞侵袭及迁移能力的影响。Western-Blot法初步探寻linc37877影响侵袭及迁移的机制。 结果:linc37877在黑素瘤细胞株中的表达水平明显高于黑素细胞(P＜0.05)，其中在黑素瘤细胞株A875中表达量最高。linc37877绝大部分分部于细胞核。干扰黑素瘤细胞linc37877表达后，linc37877的表达水平明显降低(P＜0.05)。干扰linc37877表达后，A875细胞的增殖能力明显下降(P＜0.05)，凋亡显著增加(P＜0.05)。肿瘤迁移及侵袭能力明显下降(P＜0.05)，基质金属蛋白酶家族MMP2、MMP9蛋白的表达下调，而E-catenin，N-catenin及Vimentin无明显改变。 结论:linc37877主要定位于细胞核，能够促进黑素瘤细胞的增殖，抑制凋亡，提高其侵袭和迁移能力。其侵袭能力的增加可能和MMP2、MMP9蛋白有关，而与上皮间质转化无关。
肢端雀斑痣样黑素瘤;长链非编码RNA;linc37877;恶性行为;表达谱分析
中国医学科学院北京协和医学院
博士
皮肤病与性病学
孙建方
2019
中文
R739.5
2020-06-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）