A型流感病毒通用VLPs疫苗的研究与通用抗体的评价
A型流感病毒(IAV)是囊膜型的，分节段的，负链RNA病毒，属于正黏病毒科，流感病毒属。A型流感病毒由8个基因片段组成，每个基因片段编码至少一种蛋白质。迄今为止，IAV可编码13种病毒蛋白。基于病毒表面蛋白血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的抗原差异，可将IAV分为18个HA和11个NA亚型。近年来，跨越动物—人类宿主物种屏障的A型流感病毒的病毒数量愈来愈多，给人类健康带来严重威胁。目前，流感病毒疫苗是预防流感病毒的有效方法，特别是应对季节性流感的重要手段。然而，流感病毒的主要抗原血凝素(HA)易发生基因突变，当疫苗毒株与流行毒株不匹配时，增加了流感病毒在人间传播流行的风险。因此，A型流感病毒通用VLPs疫苗与通用抗体的研究，对于应对抗原漂移变异后的流感病毒在人、动物间的流行具有重要意义。 一、通用型流感病毒疫苗的研究方向主要有以下几个:血凝素HA茎部蛋白;膜蛋白M2离子通道的胞外域蛋白(M2e);内部核蛋白(NP)和基质蛋白(M1)。本研究选择高致病性禽流感病毒H5N1A/meerkat/Shanghai/SH-1/2012(SH-1 clade 2.3.2.1;group 1)的HA茎部蛋白(HA Stem Protein，HLHA)、核蛋白(Nuclear protein,NP)、基质蛋白(Matrix Protein，M1)和A型流感病毒的融合蛋白5M2e(2个人源、1个猪源和2个禽源)，及融合蛋白HL5M2e(5M2e嵌合入HLHA以替补HA头部的位置)为靶抗原，通过昆虫—杆状病毒表达系统来构建和制备AIVVLPs，并对其进行免疫原性研究。通过滴鼻途径免疫小鼠，3种AIVVLPs对BALB/c小鼠呈现出80％-90％不等的保护率。所有数据显示，HL5M2eVLPs的免疫原性最好。因此，以HL5M2eVLPs为基础开发通用型AIV疫苗具有潜在的发展空间。 二、考虑到免疫接种的疫苗应以能够诱导小鼠的黏膜免疫为主，使小鼠能够获得足够的黏膜免疫抗体sIgA，做好第一道防线。基于此，在HL5M2eVLPs的基础上，又拯救了表达黏膜佐剂融合蛋白glycosylphosphatidylinositol-anchoredCCL28(GPI-CCL28)和glycosylphosphatidylinositol-anchoredGM-CSF(GPI-GM-CSF)基因的重组杆状病毒，制备出嵌合型AIVcVLPs(CCL28cVLPs、GM-CSFcVLPs和CCL28/GM-CSFcVLPs)。与AIV病毒样颗粒HL5M2eVLPs(含HL5M2e、NP和M1)相比，可保护BALB/c小鼠对不同亚型的A型流感病毒的攻击呈现不同的存活率:同源H5N1A/meerkat/Shanghai/SH-1/2012(SH-1;clade 2.3.2.1;group 1)可达100％;异源鼠适应株H1N1A/Changchun/01/2009(group 1)可达50％-60％;异源鼠适应株H3N2A/baikalteal/Shanghai/SH-89/2013(group 2)可达40-50％和异源鼠适应株H7N7A/LesserWhite-frontedgoose/HuNan/412/2010(group 2)可达10-20％。通过滴鼻免疫结果显示，嵌合了CCL28和GM-CSF的嵌合型AIVcVLPs可作为一种具有交叉保护活性的A型流感病毒疫苗候选株，为研发能够针对不同亚型A型流感病毒的通用型流感疫苗奠定实验室基础。 三、对3株A型流感病毒通用型人源化抗体F10、H98和H40进行了构建和表达，以及体外血凝抑制活性和中和活性的鉴定。结果显示，人源化mAbF10比其它两种人源化mAb具有更高的中和滴度和更宽的中和范围，可作为用于构建随机突变抗体库的基础抗体，为接下来的抗体筛选工作奠定了实验室基础。
A型流感病毒;通用A型流感病毒样颗粒;黏膜免疫;交叉保护;人源化抗体
中国医学科学院北京协和医学院
博士
免疫学
夏咸柱
2019
中文
R373.1
2020-06-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）