原发性干燥综合征新型预测模型、作用通路及差异基因研究
第一部分原发性干燥综合征合并严重血小板减少症患者治疗反应的预测 目的 探讨原发性干燥综合征(pSS)合并严重血小板减少症治疗反应的预测指标。 方法 选2006-2016年北京协和医院风湿免疫科住院的pSS合并严重血小板减少症的患者，对治疗反应进行分层并收集相关临床资料，评估相关指标对治疗反应的预测价值。 结果 30例pSS合并严重血小板减少症患者，其中具备有效骨髓穿刺者20例。完全缓解14例，部分缓解7例，无缓解9例。20例患者骨髓中巨核细胞数(28.1±17.7)个/玻片(20～79)，其中颗粒型巨核细胞(21.5±10.7)个/玻片(0～45)，裸核型巨核细胞(3.0±0.6)个/玻片(0～18)。骨髓中巨核细胞分类以颗粒巨核细胞为主，占(74.1±17.5)％;产板型巨核细胞占(19.2±6.8)％;完全缓解者[13.0(9.2，23.5)]/玻片和部分缓解者[7.0(7.0，20.0)/玻片]的骨髓中巨核细胞数显著多于未缓解者[5.0(1.0，6.0)/玻片;P＜0.05];完全缓解者和部分缓解者者的颗粒巨核细胞显著多于未缓解者(P＜0.05)。临床治疗有效者(完全缓解者+部分缓解者)巨核细胞数[28.10(8.5，26.5)个/玻片]、颗粒巨核细胞数[10.0(6.0，22.5)个/玻片]显著多于未缓解者(P＜0.05)。骨髓巨核细胞数目与外周血CD8+T细胞比例呈显著负相关(r=-0.707，p=0.005)。受试者操作特征(ROC)曲线分析显示，巨核细胞数目6.5/玻片为临床治疗有效与无效的界值，其曲线下面积为0.879，敏感性为92.3％，特异性85.7％。临床决策曲线分析显示，骨髓巨核细胞数目与外周血CD8+T细胞比例的联合预测模型在风险阈值在0.1-0.5时净获益显著高于骨髓巨核细胞数目预测模型及外周血CD8+T细胞预测模型。 结论 骨髓穿刺检查和外周血CD8+T细胞比例(对比淋巴细胞)对pSS合并严重血小板减少症患者的治疗反应具备一定预测价值，骨髓穿刺结果中巨核细胞数≤6.5及外周血CD8+T细胞比例＞34.2％可能提示治疗反应相对欠佳，巨核细胞数与CD8+T细胞比例的联合模型在预测临床反应时净获益最高。 关键词:原发性干燥综合征;血小板减少;巨核细胞 第二部分Toll样受体7在原发性干燥综合征患者外周血B细胞中的表达及通路研究 目的 原发性干燥综合征(Primary sjogren syndrome，pSS)具备B细胞活化、RNA相关抗体的过度产生及外周血B细胞中过渡期B细胞亚群比例升高等特征性表现，而越来越多的证据表明Toll样受体7(Toll-like receptors 7，TLR7)的激活在自身免疫病小鼠模型中对上述3类病理过程具有促进作用，同时一些研究发现pSS患者体内TLR7表达较健康对照显著升高。为进一步探索TLR7的表达是否与pSS的病情活动及损害相关，我们设计并实施了本研究以验证其在pSS中的作用. 材料与方法 选取21名pSS患者及年龄、性别匹配的12名健康对照，收集并分离PBMC后进一步提取B细胞，其后用实时定量PCR技术测定患者及健康对照外周血B细胞TLR7的表达，同时用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)测定对B细胞活化有重要作用的血清B淋巴细胞活化因子(B-lymphocyte activating factor，BAFF)浓度，并用流式细胞术测定外周血过渡期B细胞(CD27-CD24hiCD38hi/过渡期B细胞)中BAFF相关受体(BAFFR、TACI、BCMA)的表达情况，最后将患者及健康对照的测量结果进行比较分析。 结果 pSS患者外周血B细胞中的TLR7mRNA较健康对照组显著上调(p=0.004)，并与SSDAI(SS disease activity index)((r=0.7545;p=0.0001)和SSDI(SSdamageindex)(r=0.7298;p=0.0003)相关。与健康对照组相比，血清BAFF浓度在pSS患者组中显著升高(p=0.041)，但与TLR7mRNA的表达无明显相关性。TACI在pSS患者组中的总B细胞及过渡期B细胞中表达较健康对照组升高，TACI在pSS患者总B细胞中的表达与TLR7mRNA的表达程度呈正相关(r=0.763，p=0.004)，BAFFR在pSS患者组中总B细胞的表达较健康对照组为低(p=0.018)，BCMA在两组间的表达无明显差异。 结论 pSS患者组中外周血B细胞的TLR7表达较健康对照显著升高，并与疾病活动度及损伤程度相关，结合既往实验结果，提示TLR7可能参与pSS的发病并对病情有评估作用，此外患者组血清BAFF浓度及TACI表达水平上升并均与TLR7表达程度相关，结合已有证据，提示BAFF可能通过TACI调节TLR7的表达。TLR7可能成为pSS新的治疗靶点，值得深入研究。 关键词:原发性干燥综合征;Toll样受体;B细胞 第三部分运用生物信息学技术分析原发性干燥综合征差异基因的相关通路 背景 作为最常见的自身免疫性疾病之一，原发性干燥综合征(pSS)可出现全身脏器受累，我们在本部分研究中通过生物信息学方法对pSS患者与健康对照的差异表达基因(DEGS)进行筛选，以进一步探讨其生物学机制。 方法 我们从GEO数据库下载了GSE40611数据集，其内包含17个pSS样本和18个匹配的健康对照腮腺组织样本的基因表达数据，除筛选DEGs外，我们将这些DEGs进一步进行了GO(GeneOntology)分析和KEGG富集分析，同时利用Cytoscape将DEGs相关产物构建了蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络并进行了模块分析。 结果 共鉴定出155个上调DEGs(uDEGs)和24个下调DEGs(dDEGs)。GO分析结果表明，uDEGs与免疫应答、信号转导、固有免疫应答过程显著相关，dDEGs与对药物的反应显著相关。在KEGG通路分析中，uDEGs在细胞粘附分子(CAMs)通路、病毒感染通路、噬菌体通路、dDEGs在生物合成黏多糖硫酸角化酶生物通路等方面都有较为显著富集。然后我们从PPI网络中筛选出核心基因CXCL9、HLA-DRB1、FYN、LCP2、HLA-DRB5、ITK、STAT1和MX1。对构建的核心模块进行功能分析表明，pSS与趋化因子信号通路、细胞因子-受体相互作用和Toll样受体信号通路相关。 结论 本研究通过生物信息学分析揭示了PSS的中核心基因和重要通路，这些基因和通路可能成为pSS潜在治疗靶点。但是，我们仍应该进行更多的研究和实验验证以进一步验证本研究的推测。
原发性干燥综合征;差异基因;生物信息学;血小板减少症;治疗反应
中国医学科学院北京协和医学院
博士
内科学；风湿免疫
曾小峰
2019
中文
R593.2;R558.2
2020-06-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）