自噬在RFA后亚致死性热休克促进肝肿瘤快速进展中的作用研究
肝细胞癌是最常见的原发性肝脏恶性肿瘤，占全部肝脏肿瘤的80～90％，是中国最常见的恶性肿瘤之一。其死亡率高，在恶性肿瘤致死率中位居第三位。目前，肝癌治疗的主要方法依然是肝切除和肝移植，但是由于肝硬化等因素导致多数患者不适合进行肝切除和肝移植。随着影像技术和腔镜外科技术的不断发展，射频消融技术(radio frequency ablation，RFA)等局部治疗方法由于具备安全、有效、低转移的优点逐渐成为肝癌治疗的替代方法。但是射频消融技术治疗后亚致死性热休克导致的局部肿瘤残余和局部复发降低了其有效性。然而，RFA后亚致死性热休克诱导肿瘤复发的机制还不清楚。 自噬是机体分化、发育、生存和代谢必须的一种溶酶体降解途径，是维持自身稳态的一种生理性过程。其主要功能是清除并降解细胞内损伤的细胞结构碎片、衰老的细胞器和不再需要的蛋白质等大分子，当机体受到外源或内源性刺激如缺乏营养、微生物感染等应激反应时，细胞会通过自噬的发生来保证细胞内环境的稳定。在肿瘤的发生和发展中，营养的缺乏、缺氧以及放化疗治疗会导致自噬的增强，进而可以保护癌细胞免受损伤，并提高肿瘤细胞的生存能力促进肿瘤发展和转移。 RFA后亚致死性热休克作为肝癌治疗中的外源刺激因素，在治疗过程中是否会引发肝癌细胞的自噬目前尚未发现有关报道。鉴于前述自噬在机体自我保护和自噬性死亡中的作用，推测自噬与RFA后亚致死性热休克诱导的肿瘤快速进展中可能存在一定的联系。因此，本研究首先检测接受RFA治疗的患者过渡区（亚致死性热休克区）中自噬水平的变化，然后体外模拟RFA在体治疗中过渡区的温度环境，建立RFA体外细胞处理模型，研究亚致死热休克(Sub-lethal heat shock，SHS)处理对肝癌细胞自噬的影响;同时，研究自噬在SHS处理增强肝癌细胞增殖和侵袭能力以及抗凋亡能力中的作用。最后，研究SHS处理对肝癌细胞干性指标CD133表达的影响以及自噬在SHS处理调节CD133表达中的作用;同时，探讨CD133在SHS处理增强肝癌细胞增殖和侵袭能力以及抗凋亡能力中的作用。结果表明: 1.RFA在体肝癌治疗后，过渡区细胞肿瘤细胞自噬水平明显升高。 2.将细胞接种到培养瓶中，然后用石蜡密封好，放到50℃水浴中处理10min，体外模拟体外模拟RFA在体肝癌治疗中过渡区温度环境。实验证明，SHS处理模拟RFA在体肝癌治疗中过渡区温度环境增强自噬体的生成，并诱导自噬流。 3.SHS处理后的肝癌细胞增殖和侵袭能力以及抗凋亡能力均明显增强。 4.抑制自噬体的合成或者抑制自噬流，均能够抑制SHS处理后对肝癌细胞增殖和侵袭能力以及抗凋亡能力的增强。 5.RFA在体肝癌治疗后诱导过渡区细胞干性指标CD133的表达，SHS处理模拟RFA在体肝癌治疗中过渡区温度环境也增强肝癌细胞中CD133的表达。 6.抑制自噬，抑制SHS处理后对肝癌细胞CD133表达的增强。 7.抑制CD133，抑制SHS处理对肝癌细胞增殖和侵袭能力以及抗凋亡能力的增强。 综上所述，SHS可以通过提高自噬促进肝癌细胞中CD133的表达，最终导致肝癌细胞增殖和侵袭能力以及抗凋亡能力的增强。这为有效规避RFA技术的弊端并提高其治疗效果提供了重要的理论基础。
肝细胞癌;射频消融术;亚致死性热休克;癌细胞自噬
陆军军医大学
博士
普通外科学
马宽生
2016
中文
R735.7;R730.55
2020-03-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）