慢性乙型肝炎保护性T细胞库的研究
目的： 细胞免疫在HBV感染病毒清除和肝损伤中的作用至关重要。HBV所诱导的免疫应答具有典型的“双刃剑”作用:一方面是清除病毒，使得疾病痊愈;另一方面是免疫损伤，导致肝炎、肝硬化甚至肝癌。因此，HBV免疫保护及损伤的机制是发展慢性HBV干预手段的关键科学问题。免疫库谱(immune repertoire)包含人体所有的免疫细胞，数量庞大的T细胞抗原受体库(T cell receptor repertoire)反映了个体针对数亿种外界抗原的所有细胞免疫应答的特征。因此对免疫库的剖析，可以让更全面的了解个体针对某种特定抗原的免疫应答特征，如慢性HBV患者同时存在的保护性应答和损伤性应答。T细胞抗原受体库具有非常丰富的多样性，可达1×1011到1×1014，随着下一代测序技术的发展，使得实现T细胞受体库的全部基因的测序成为可能。对具有不同临床转归的慢性HBV临床队列的免疫库谱进行测序分析，可能有助于深入认识清除HBV病毒相关的保护性免疫应答特征及其相关机制。研究目标为: 1阐明HBeAg血清学转换相关的CD8+T细胞受体库(TCR repertoire)的特征; 2描述HBsAg血清学转换相关的CD8+T细胞TCR repertoire的特征及相应的T细胞功能; 3从TCR repertoire的层面分析同卵双生子感染HBV后发生不同的转归的机制。 方法： 1已建立的治疗性疫苗临床试验的慢性HBV队列，40人发生HBeAg血清学转换，35人未发生血清学转换。采用系统免疫学的方法建立T细胞受体库(TCRrepertoire)并进行深度测序，共检测了75名慢性乙肝患者入组时CD8+T细胞TCRrepertoire，同80名健康人做比较，描述慢性HBV的免疫库的特征并定义与HBeAg血清学转换相关的保护性T细胞克隆，并对克隆的表达频率与治疗后病毒学、血清学指标的改变进行相关性分析。 2在HBeAg转阴的基础上，继续给予干扰素治疗，发生HBsAg转阴的18名慢性HBV患者为研究目标，13人自发转阴以及14人HBsAg未转阴的慢性乙肝患者作为对照队列。通过高通量测序的方法得到TCR repertoire的信息，分析HBsAg血清学转换相关的T细胞克隆。同时，建立RNA库从而研究HBsAg转阴的CD8+T细胞在转录组水平的特征。 3收集了6对感染HBV后临床转归不同的同卵双生子队列和3队健康对照的同卵双生子，从CD8+T细胞TCR repertoire出发，研究慢性HBV同卵双生子的TCRrepertoire的特点及不同临床转归对它的影响。 结果： 1慢性HBV患者的TCR reperotire有别于健康对照，存在部分疾病独有的克隆。定义了其中分别与保护性免疫、免疫损伤相关的两群克隆。A群代表了HBV保护性克隆，与HBeAg转阴和疾病的预后直接相关。B群克隆与肝脏的炎症损伤相关。A、B群克隆的关系呈此消彼长式的，A群所占的比例高的患者发生良好转归的机率更大，很有可能伴随着血清学转换、ALT下降、病毒DNA拷贝数降低等临床检验指标的改变。 2HBsAg转阴的相关克隆不同于HBeAg转阴的，因此定义了一群与HBsAg转阴相关的克隆。HBsAg转阴的CD8+T细胞的在体外HBV肽库刺激的功能试验中展现出与HBeAg转阴的CD8+T细胞相似的功能。RNA sequencing数据分析可以得出HBsAg转阴的免疫细胞活化、增殖、功能的相关基因表达上调，HBeAg转阴的RNA-sequencing与之相近，两者的T细胞功能相关的基因表达高于HBeAg未转阴的样本。 3同卵双胞胎的遗传背景一致，HLA分型完全相同，TCRβ的V基因取用分布具有相似性。V基因取用的相似性与遗传有关，与健康状态，转归情况无关。J基因的取用则相对随机。在慢性HBV的双胞胎间CDR3克隆的相似性比健康对照双胞胎更明显，双胞胎间的重叠克隆更多。感染引起TCR repertoire的改变在相同遗传背景的情况下相近。然而，感染HBV不同临床转归的双胞胎的TCR repertoire并不存在明显的区别。 结论： 1首次定义了HBeAg转阴和HBsAg转阴相关的保护性T细胞克隆。保护性克隆与临床转归的相关性可以指导临床的治疗，HBV保护性免疫库的发现有可能成为慢性HBV免疫治疗和过继转移治疗的新靶点。 2在HBeAg转阴的基础上继续给予IFN-α治疗发生HBsAg转阴的慢性HBV的免疫库在结构上和功能上都有明显的改变，可能是引发良好预后的潜在机制。因此，认为临床上实现HBeAg转阴时，以免病情反复，应继续坚持给药治疗，实现HBsAg血清学转换的理想临床治疗终点。 3首次鉴定了同卵双胞胎感染HBV的TCR repertoire的特征，分析了遗传背景与环境对TCR repertoire形成的影响。
慢性乙型肝炎;保护性T细胞库;免疫应答;基因测序
陆军军医大学
博士
免疫学
吴玉章
2016
中文
R512.620.3
2020-03-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）