瘦素对小鼠胆固醇代谢调控的研究
瘦素是由脂肪组织分泌的一种蛋白类激素，对调控机体的能量代谢发挥重要的作用。但是，有关瘦素对动物胆固醇代谢调控的研究所知甚少。为此，本论文通过二个方面探索了瘦素对小鼠胆同醇代谢的调控研究。首先，在饲料中添加共轭亚油酸，制备一种体内瘦素缺乏的小鼠模型，并用缓释胶囊的方法补充小鼠体内的瘦素，从而研究该小鼠体内血液和肝脏中的胆固醇水平的变化。然后，利用CLA代谢障碍型小鼠、ob/ob，Foxo1△DBD/+（双基因改造鼠）和野生型小鼠检测瘦素敏感性与胆固醇代谢相关因子的关系。最后，在六种细胞中研究了瘦素对胆固醇逆转运过程中的关键因子1类清道夫受体(SRB1)基因启动子活性的调控作用。 1.在实验组小鼠饲料中添加1.5％的共轭亚油酸，对照组小鼠饲料中添加1.5％的亚油酸，制备一种体内瘦素缺乏的小鼠模型。通过手术在小鼠的背部皮下植入注满1μg/μL Leptin溶液的ALZET(R)渗透泵，补充小鼠体内的瘦素，从而研究该小鼠生理水平的变化。结果显示:(1)该模型小鼠体内肝脏肿大脂肪变性，血液中瘦素水平显著性降低，肝脏组织的甘油三酯含量升高，胆固醇的含量降低，血液中胆固醇的含量升高。(2)在缓释泵补充体内瘦素后，小鼠肝脏的脂肪变性得到了改善，肝脏组织的胆固醇和甘油三酯恢复至正常水平，且血液瘦素增加到与对照小鼠相当的水平，胰岛素敏感性增加。 2.在CLA诱导的代谢障碍型小鼠、ob/ob，Foxo1△DBD/+（双基因改造鼠）和野生型小鼠中，通过蛋白免疫印迹和实时荧光定量PCR的方法检测瘦素敏感性与胆固醇代谢相关因子的关系。结果显示:(1)在CLA代谢障碍型小鼠瘦素补充后，肝脏中的基因HMGR和基因CYP7a1在mRNA水平的表达无显著性变化，蛋白水平的表达也无显著性变化;基因SRB1和基因LCAT在蛋白水平的表达显著性升高，在mRNA水平有升高的趋势但差异不显著;(2)双基冈改造鼠肝脏的基因SRB1在mRNA水平无显著性变化;(3)野生型小鼠体内补充瘦素后，肝脏的基因SRB1在mRNA水平显著性下降。 3.为了进一步研究瘦素对胆固醇逆转运过程中的关键因子1类清道夫受体(SRB1)基因启动子活性的调控作用。我们在细胞水平上进行了探索。首先克隆基冈SRB1启动子序列与载体pGL3-basic连接，构建了重组质粒pGL3-SRB1，然后分别转染到293Rb细胞、瘦素受体各种突变体细胞中，包括293Ra、293Y1、293Y2、293Y3细胞和HepG2细胞，用双荧光素酶试剂盒检测SRB1基因启动子的活性，结果显示:(1)293Rb细胞中瘦素刺激下，SRB1基因启动子的活性显著下降;(2)瘦素受体各种突变体细胞:在293Y1、293Y2细胞内，瘦素刺激下pGL3-SRB1的启动子活性显著性下降;在293Ra、293Y3细胞内，瘦素刺激下pGL3-SRB1的启动子活性无显著性差异。 结论:1.本研究成功制备了CLA诱导的代谢障碍型小鼠模型，其中小鼠体内瘦素水平显著性下降，在补充瘦素后，血液中胆固醇水平下降而肝脏胆固醇水平上升，胆固醇逆转录相关基因LCAT和基因HMGCR表达无显著性差异;基因SRB1和CYP7a1在蛋白表达水平显著下降，mRNA表达水平有上升趋势但差异不显著，说明瘦素对胆固醇代谢有明显调控作用。 2.在双基因改造小鼠中胆同醇代谢影响因子SRB1表达无明显改变;在野生型小鼠体内补充瘦素后，基因SRB1在mRNA水平显著性下降。 3.在培养的细胞中，瘦素对SRB1基因的启动子有显著的抑制作用，并且抑制作用依赖瘦素受体中的Tyr1138说明瘦素是通过JAK-STAT这一通路作用SRB1启动子的。
瘦素;胆固醇代谢;1类清道夫受体;基因启动子
河南农业大学
硕士
基础兽医学
肖传斌;杨国庆
2019
中文
Q571
2020-03-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）