LHR膜外区蛋白主动免疫对公猪生殖性能及肌肉品质的影响
为了控制公猪的生长性能以及便于管理，常常会对其进行去势。去势的方法包括手术机械去势、药物去势以及免疫疫苗去势。前两种方法容易给公猪带来剧烈的疼痛以及引起其他并发症，也不符合现代动物福利的要求和理念。而免疫去势是利用去势疫苗产生的抗体去中和性腺轴反馈系统中相应的内源激素或者受体，进而抑制性类固醇激素的产生、配子的发生以及性腺的发育。该方法不仅有效，对公猪带来疼痛和伤害也比较小。从之前的研究可知在雄性动物体内，垂体释放的促黄体生成素(LH)与睾丸间质细胞上的黄体生成素受体(LHR)结合，激活LHR介导的环磷酸腺苷/蛋白激酶A（cAMP/PKA）途径，从而调控雄激素睾酮的产生，进而调控其生理功能。因此将LHR作为免疫原开发去势疫苗，可能会起到抑制性类固醇激素的产生和性腺发育的作用。 本研究从LHR的结构和功能相结合入手，通过免疫原性分析，将LHR细胞外与LH结合的保守部分片段克隆，利用原核生物表达体系表达并纯化。获得的LHR膜外区蛋白片段，与两种不同的佐剂（ISA61佐剂和ISA201佐剂）分别做成制剂，免疫断奶仔猪。并用美国的Improvac疫苗作为阳性对照组。免疫过后每月龄检测各组所产生的抗体水平和性激素水平，并对屠宰后肌肉品质进行检测，从而探究以LHR制备雄性仔猪去势疫苗的可行性。主要研究结果如下: 1.首先对血清抗体和血清睾酮的检测进行检查，结果显示:在血清抗体方面，ISA61佐剂组和ISA201佐剂组均能刺激机体产生相应的抗体，且在初次免疫后40天达到最高，随后抗体效价开始下降，在第二次加强免疫后ISA201佐剂组抗体效价又开始上升，但是ISA61佐剂组无变化。在血清睾酮方面，ISA201佐剂组初次免疫和二次加强免疫后睾酮含量逐渐增加，在初次免疫40天时达到峰值但是低于空白对照组，且随后一直低于空白对照组，但是ISA61组在初次免疫40天时睾酮含量达到最高水平并且远远高于空白对照组，且一直保持高水平。以上结果说明使用ISA201作为LHR膜外区片段去势疫苗的佐剂，可以刺激机体产生相应的抗体以中和内源的LHR，抑制睾酮的产生。但是该佐剂并不能产生强烈的长期的免疫反应，抗原呈递时间较短。而选择ISA61作为佐剂能刺激机体产生相应的抗体，但远远不足以起到中和内源LHR的作用。 2.对睾丸和附睾大小以及附睾内精子数量的检测，结果显示:Improvac疫苗组跟其它三组相比，睾丸和附睾萎缩最为明显，且睾丸组织内各级生精细胞缺失，附睾中精子数量最低。ISA201佐剂组跟ISA61佐剂组和空白对照组相比，睾丸和附睾相对较小，睾丸组织内各级生精细胞和附睾中精子数量也较少。ISA61佐剂组和空白对照组相比基本没有什么变化。这说明ISA201作为LHR膜外区片段去势疫苗佐剂进行免疫可以抑制公猪睾丸和附睾的发育以及精子的发生，而ISA61佐剂制备的去势疫苗不可以。 3.对屠宰时肌肉品质和体重的检测，结果显示:对于肌肉品质的检测中，除了在肌内脂肪和大理石纹评分这两个指标上ISA201佐剂组低于其他三组，在肌肉色值、肉色评分、pH值、系水力、水分、嫩度等其他指标上，四组基本一致并无明显差异。其中肌内脂肪是肉质评判的重要指标，这说明，ISA201作为去势疫苗佐剂可以降低肌内脂肪，影响肉质。对于体重和日增重的检测中，四组基本无明显差异，这说明去势疫苗并不影响公猪的生长。 综上所述，本次试验验证了LHR作为去势疫苗开发靶点的有效性，其疫苗可以影响公猪的生殖性能。我们的实验为家畜的免疫去势，野生动物的繁殖控制以及人类避孕疫苗的开发提供了参考和依据。
公猪;去势疫苗;黄体生成素受体;生殖性能;肌肉品质
华中农业大学
硕士
基础兽医学
刘国权
2019
中文
S858.28;S852.4
2019-10-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）