催产素对LPS所致小鼠急性肺损伤的保护作用
临床上，急性肺损伤（acute lung injury,ALI）的严重阶段表现为急性呼吸窘迫综合症(acute respiratory distress syndrome，ARDS)，是引起患者急性肺衰竭的主要因素。该病的死亡率很高，主要表现为难治性低氧血症和急性进行性呼吸困难。病理表现主要为弥漫性肺组织损伤，发病机制主要为炎症小体的激活和促炎介质的释放。尽管对其发病机制和治疗手段的研究已取得了一些进展，但是真正用于临床应用的药物寥寥无几。催产素(oxytocin，OT)是主要由下丘脑的室上核和室旁核合成，经下丘脑神经末梢释放到血液循环中的神经垂体激素，被广泛应用于分娩过程中促进子宫平滑肌收缩，来加快产程和预防产后大出血。近年来随着对催产素作用机制的研究，其抗炎和抗氧化特性引起越来越多的关注。研究表明:催产素不仅具有抗氧化和调节心血管的功能，以延缓动脉粥样硬化疾病的进展，而且还可以减轻LPS所致的巨噬细胞和小胶质细胞的炎症，减轻组织损伤程度。 目的： 本研究旨在通过催产素作用于LPS诱导的小鼠急性肺损伤模型，从而探讨催产素对小鼠急性肺损伤是否具有保护作用。为了进一步说明催产素对急性肺损伤的保护机制，利用催产素受体阻断剂L-368，899来进一步验证。 方法： 本研究采用腹腔注射LPS诱导小鼠急性肺损伤模型。36只小鼠随机分为4组（每组n=9）:对照组和3个处理组（Control组，LPS组，LPS+OT组，LPS+OT+L-368，899组）。所有的药物均通过腹腔注射给药。LPS处理2小时后，腹腔注射戊巴比妥钠，麻醉小鼠后，进行气管插管收集肺泡灌洗液(BALF)，测定灌洗液中的炎症因子和髓过氧化物酶(MPO)的活性，以评估肺组织的炎症反应。留取灌洗液结束后收集肺组织，进行苏木素-伊红(HE)染色，观察肺组织的病理损伤程度;测量肺组织湿干重比(W/D)观察肺组织水肿和渗出的严重程度，Western Blot和qPCR法测定肺组织中炎症蛋白的表达和炎症因子的分泌情况。采用免疫组化(IHC)和免疫荧光(IF)染色法进一步验证肺组织中炎症蛋白的表达。用OT ELISA试剂盒测定肺组织和外周循环中的OT水平，以评估主要起抗炎作用的是外源性OT还是内源性OT。 结果： 本研究中，各组BALF中MPO活性检测，以及肺组织的HE染色、W/D结果均显示催产素可以明显地减轻LPS所致ALI的肺组织炎症细胞渗出、病理学损伤和肺组织水肿，而催产素受体阻断剂L-368，899明显地减弱催产素的该保护作用。ELISA和qPCR结果显示，催产素可明显地抑制LPS所致ALI中促炎因子IL-1β、IL-6和IL-18的分泌，而抑炎因子IL-4和IL-10的分泌却明显增加。Western Blot、免疫荧光和免疫组化染色法结果均显示催产素抑制LPS所致ALl中TLR4、NF-κB、NLRP3、Caspase-1蛋白的表达，而L-368，899却明显地减弱催产素的该保护作用。另外结果显示:LPS使肺组织内催产素受体的表达量增加，以及L-368，899增加LPS所导致的ALI中炎症蛋白的表达量。ELISA试剂盒测定肺组织和外周循环中催产素水平，结果显示:LPS使肺组织中的催产素水平下降，而L-368，899预处理组中的催产素却升高;但外周血中的催产素水平没有统计学差异。这些结果说明催产素对LPS所致的ALI具有保护作用，且主要为外源性催产素发挥保护作用，而其受体阻断剂L-368，899明显地抑制催产素的该保护作用。 结论： 我们的研究结果表明: 1.外源性催产素对LPS导致的急性肺损伤具有保护作用。 2.催产素通过与受体OTR的结合抑制TLR4/NLRP3/NF-κB信号通路，减轻ALI。
急性肺损伤;催产素;药理机制
山东大学
硕士
麻醉学
吴剑波
2019
中文
R563;R974
2019-09-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）