TAMs/CXCL--1激活NF--κB/SOX4通路促进乳腺癌转移的作用和分子机制研究
目的: 研究肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)分泌的CXCL-1促进乳腺癌转移的作用并阐明其相关分子机制和探讨消癖颗粒抑制乳腺癌转移的作用，为预防和治疗乳腺癌提供新策略。 方法: 1.通过Cytokine array实验，筛选TAMs细胞高表达的细胞因子，并利用免疫组化实验，在MMTV-Pyvt+/-转基因荷瘤小鼠中比较转移灶和原发灶中CXCL-1和转移相关指标(EMT)的表达差异。 2.利用MTT实验、划痕实验、Transwe ll实验、明胶酶谱实验、Western blot实验探讨cxcl-1是否影响乳腺癌细胞的增殖、迁移侵袭能力。 3.利用Q-PCR技术筛选出CXCL-1作用于乳腺癌细胞的靶基因，利用脂质体转染、病毒转染等沉默或重组相关基因，Western blot实验、免疫荧光等手段验证相关通路。 4.在体内，活体成像技术观察TAMs分泌的CXCL-1对Nod-scid小鼠肺转移的作用，观察小鼠乳腺癌肿瘤生长的作用，免疫荧光和免疫组化技术观察相关蛋白的表达。 5.人乳腺癌组织芯片验证CXCL-1与乳腺癌病人生存期等的关系。 6.通过Cytokine array实验，验证消癖颗粒的作用靶点。 7.划痕实验和transwell实验证明消癖颗粒能抑制乳腺癌转移侵袭能力。 结果: Cytokine array证实了CXCL1是TAMs分泌的最多的趋化因子，而TAMs分泌的CXCL1可以促进乳腺癌的迁移和侵袭能力，以及促进小鼠和人类乳腺癌细胞的上皮-间质转化(EMT)过程。Q-PCR筛选进一步证实SOX4为CXCL1作用于乳腺癌细胞后表达最高的基因。通路研究显示，CXCL-1作用于乳腺癌是通过激活NF-κB/SOX4转录途径。在体内乳腺癌异种移植中，TAMs中CXCL1沉默导致乳腺癌的生长和转移率显著降低。生物信息学分析和临床研究最终表明，高CXCL1表达与乳腺癌淋巴结转移、整体生存率和基底样亚型有显著相关性。消癖颗粒的作用靶点是TAMs/CXCL1，能抑制乳腺癌转移。 结论: 乳腺癌TAMs分泌的CXCL-1能激活NF-κB/sox4通路促进乳腺癌转移。消癖颗粒通过TAMs/CXCL1靶点抑制乳腺癌转移侵袭能力。
乳腺癌;肿瘤转移;肿瘤相关巨噬细胞;消癖颗粒;实验药理
广州中医药大学
硕士
中医内科学
梁伟雄
2018
中文
R737.9;R285.5
2019-08-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）