大黄素基于JNK3通道干预神经病理性疼痛的机制研究
目的: 神经病理性疼痛(NP)是公认的世界难题，它由各种疾病或损伤引起，临床表现多样，长期影响患者生活质量。导致NP的原因很多，可根据部位分为外周性和中枢性，还可细分为异位放电、炎症介质、神经生长因子及其受体、离子通道的表达、感觉神经损伤和脊髓结构重塑、交感神经维持性疼痛、谷氨酸能调节、JNK通路、胶质细胞等。基于JNK信号通路研究NP，研究大黄素治疗NP的靶点，寻找治疗神经病理性疼痛(NP)的中药制剂，推进中医药的发展。 方法: 观察大黄素对bmSNI模型大鼠疼痛行为的影响:60只150-220g健康雄性SD大鼠随机平均分为正常组(C)、假手术组(SH)、模型组(M)、大黄素组(D)、SP600125组(SP)和DMSO组(DS)共6组，通过剪断大鼠双侧胫神经造成bmSNI模型，后3组分别在手术完毕当天开始予大黄素40mg/kg/d灌胃、SP60012520μL/d、0.25g/L鞘内注射和0.05％DMSO20μL/d鞘内注射，D组连续给药14天，SP组和DS组连续给药7天，并于造模前1、后1、2、3、5、7、10、14天测机械痛敏和热痛敏，在造模后7天取材端脑、腰膨大，对腰膨大进行JNK3蛋白免疫印迹检验，和对端脑进行JNK3mRNA实时荧光PCR检测。用EXCEL、SPSS20.0、Photoshop和GraphPad等对行为学、蛋白印迹数据和实时荧光PCR数据进行统计分析和统计柱状图制作。 结果: 1.机械痛阈值结果:第一，bmSNI模型大鼠术后机械痛敏明显下降，在术后7天下降到最低值5.62g。第二，大黄素对bmSNI模型大鼠有显著的治疗效果，镇痛效果大于SP600125。相比M组机械痛阈值最低是在术后7天5.62g，大黄素组是在术后3天9.4133g，此后开始逐渐上升，机械痛阈值均显著高于M组。证明大黄素对治疗bmSNI模型的神经病理性疼痛是有效的。第三，大黄素对bmSNI模型大鼠的镇痛效果大于SP600125。SP600125对神经病理性疼痛有确切治疗效果，D组机械痛阈值术后第2、3天显著低于SP组，术后第5天显著高于SP组。发展至最低痛阈值D组在术后第3天为9.4133g，SP组在术后第5天为7.98g。D组不仅最低值高于SP组，而且第5天后机械痛敏一直高于SP组，可以证明大黄素镇痛效果大于SP600125。对于D组刚开始机械痛敏低于SP组，考虑是大黄素的抗炎消肿效果强，对未受伤的神经有一定保护作用，未受伤的神经感知疼痛敏感而导致机械痛敏低于SP组，而后，D组机械痛敏高于SP组，证明D组对于炎症介质等清除力度较强，伤口趋于恢复，导致机械痛敏相对不敏感。由此证实证明治疗bmSNI模型的神经病理性疼痛，大黄素比SP600125更有效。 2.热敏痛阈值结果:第一，bmSNI模型大鼠热敏下降较为缓慢，持续时间不长，敏感度一般。模型组在术后5-7天热敏降低，与正常组存在统计学差异;模型组与假手术组在术后1、2、5、7、10天存在统计学差异。第二，大黄素组术后3、5、7、10天热敏比模型组高，存在统计学差异，推断大黄素对bmSNI模型大鼠有治疗作用。第三，术后用药所测热敏，大黄素组一直高于SP600125组，并在术后3天存在统计学差异，推断大黄素对bmSNI模型大鼠的治疗作用强于SP600125。 3.从行为学上来看，热痛敏结果分析趋势不如机械痛敏结果分析，这可能与bmSNI模型有关，在模型研究时就有文献指出，SNI系列模型的热刺激改变不明显。 4.蛋白免疫印迹和实时荧光PCR检测来看，术后7天各组腰膨大p-JNK3蛋白表达在统计学上无显著差异。术后7天各组端脑JNK3mRNA表达在统计学上无显著差异。 结论: 1.根据动物实验观察结果，bmSNI模型大鼠术后机械痛敏明显下降，热痛敏缓慢下降，机械痛敏在术后7天下降到最低值5.62g。 2.大黄素对神经病理性疼痛有治疗作用。SP600125是JNK抑制剂，对神经病理性疼痛有明确的治疗效果。从行为学数据分析，大黄素对模型的环节效果明显强于SP600125。 3.蛋白免疫印迹检验结果显示，腰膨大JNK3组间对比无显著差异。蛋白免疫印迹方面，JNK3表达量的均值似乎呈现一定趋势，大黄素组＞SP600125组＞假手术组＞模型组，但各组间P值比较无显著差异，该趋势的显著性无法被证实，该趋势增加样本量后可能被证实。
大黄素;神经病理性疼痛;JNK3通道;脊髓重塑;实验药理
广州中医药大学
硕士
中医临床基础
吴智兵
2018
中文
R441.1;R285.5
2019-08-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）