晋冀蒙周边地区结直肠癌对奥沙利铂耐药机制的探究
目的:本研究的目的是建立对奥沙利铂耐药的CT-26-R、SW-480-R细胞系，通过蛋白质印记技术测定两种耐药细胞株中的P-pg蛋白、E-cadherin蛋白及TNF-a的含量，分析三者之间的关系，初步探究其耐药机制，为后续研究提供理论依据及耐药细胞系模型。 方法:采用低浓度长时间接触法建立奥沙利铂耐药细胞系CT-26-R、SW-480-R。两种细胞系建立后采用CCK-8法检测两种细胞的耐药性，绘制两种细胞的生长曲线，最后采用蛋白质印迹法检测两种耐药细胞中TNT-a、P-pg、E-cadherin含量。 结果:经过6个月的时间最终获得了生长良好的、能耐受250.38μg/mL OXP的耐药细胞CT-26-R细胞系以及耐受103.3ug/mlOXP的SW-480-R细胞系。两种细胞的生长曲线如图，可见CT-26-R的细胞生长较CT-26细胞明显缓慢，CT-26-R细胞的TD为52.8h，CT-26细胞的TD则为33.6h，CT-26-R细胞的TD是CT-26细胞TD的1.57倍。SW-480-R细胞系的TD为50.4h，SW-480细胞的TD为48.1h，SW-480细胞的TD是SW-480-R细胞TD的1.25倍。两耐药细胞株均表现出了生长变缓的现象。CCK-8法检测细胞活性可发现，CT-26-R、SW-480-R细胞的对奥沙利铂的耐受性明显高于CT-26、SW-480细胞，两种耐药细胞系成功建立，并且通过冻存后可以成功复活，可以为日后的实验提供稳定的耐药细胞模型。蛋白印记法检测sw-480及sw-480-R两种细胞系内E-cadherin蛋白含量时，可见E-cadherin蛋白在奥沙利铂耐药的SW-480-R细胞中明显低于不耐药的SW-480细胞，差异有统计学意义(p＜0.05)，而P-pg蛋白及TNF-a因子在耐药的SW-480-R细胞中则较SW-480细胞明显升高，差异有统计学意义(p＜0.05);相似及结果也出现在CT-26及CT-26-R细胞系间，奥沙利铂耐药的CT-26-R细胞中E-cadherin蛋白较不耐药的CT-26细胞明显降低，差异有统计学意义(p＜0.05)，而P-pg蛋白及TNF-a因子在耐药的CT-26-R细胞中则较CT-26细胞明显升高，差异有统计学意义(p＜0.05)。 结论:本次实验成功建立奥沙利铂耐药的CT-26-R和SW-480-R细胞系，其中两种耐药细胞系中的TNF-a、P-pg含量均有不同程度的增高，E-cadherin蛋白含量降低，预示着EMT过程增强，P-pg蛋白、TNF-a的表达增强和肿瘤细胞发生耐药之间存在一定相关性。本次实验建立的两种细胞系可以作为其他类似研究的细胞模型。
结直肠癌;奥沙利铂;CT-26-R细胞;SW-480-R细胞;耐药机制
河北北方学院
硕士
外科学
薛军
2018
中文
R735.34;R730.21
53
2018-12-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）