面包酵母高效分泌型表达载体的构建与应用
分别将6段和8段DNA 片段连成菊粉酶的信号肽序列和带有检测标记的菊粉酶信号肽序列,将这两个人工合成基因片段连接于酵母表达载体pYEX<,2>的pGal<,1>启动子下,得到两套具有完整读码框的重组质粒pYES<,2>-A,pYES<,2>-B,pYES<,2>-C和pYES<,2>-HA,pYES<,2>-HB,pYES<,2>-HC. 再将天冬酰胺酶基因(ASN)连接到pYES<,2>-A和pYES<,2>-HA上,通过LiAc完整细胞转化法将重组质粒转移至而包酵母 (Sacharomyces cerevisiae)INVSCl受体菌中,得到重组酵母转化子, 酶活力测定结果表明, 已成功地在面包酵得到天冬酰胺酶的活性表达,最高酶活条件为37℃,pH8.6. SDS-PAGE电泳显示出明显的特征性表达产物带,单体分子量为34.7KD.
菊粉酶信号肽;重组质粒;面包酵母;基因表达
广西大学
硕士
微生物学
黄日波
2000
中文
Q75
42
2004-04-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）