白介素-12p35对血管紧张素Ⅱ诱导小鼠高血压心肌肥厚炎症和自噬的影响
目的: 该实验使用C57BL/6J背景的野生型(wild-type，WT)小鼠和白介素-12p35基因敲除(interleukin-12p35knockout，IL-12p35-KO)小鼠复制血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)所致的高血压心肌肥厚模型，研究心肌肥厚发生和发展过程中IL-12p35的表达情况，探讨IL-12p35基因缺失对心肌肥厚过程中的炎症和自噬调节作用，为临床治疗高血压所致心肌肥厚提供新的治疗靶点和实验依据。 方法: 1.实验分组:10-12周雄性野生型C57BL/6J16只，随机分成2组，每组8只，A组:阴性对照组，B组:阳性对照组;10-12周IL-12p35-KO雄性小鼠(C57BL/6J背景)16只，随机分成2组，每组8只，C组:实验组D组:条件对照组。 2.血压监测:使用小动物血压测量仪(BP-98A，Softron，Japan)进行尾动脉测量血压和心率。 3.心脏超声:使用小动物超声仪(Visual Sonics Vevo2100)进行数据采集。 4.心肌肥厚的检测:Real-time PCR检测心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide，ANP)、脑钠肽(brain natriuretic peptide，BNP)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)的表达。 5.心肌体重指数:心肌质量/体重(Heart weight/Body weight，HW/BW)观察心肌肥厚情况。 6.心肌纤维化:使用Masson三色特殊染色法检测心肌组织纤维化程度。 7.心肌炎症浸润:使用苏木精和伊红(hematoxylin and eosin，HE)染色观察炎症的浸润情况，免疫组织化学染色法检测CD3、CD68的表达。 8.自噬的检测:使用蛋白免疫印记(Western Blot，WB)和免疫组化化学染色检测微管相关蛋白-1轻链3(Microtubule-associated protein1light chain3，LC3)、p62的表达。 9.心肌肥厚IL-12p35的表达:Real-time PCR检测IL-12p35。 10.信号通路:使用WB检测JAK2/STAT4(signal transducers and activators of transcription)通道磷酸化情况，进行下游通路机制的研究。 11.统计:使用SPSS18.0软件进行数据的统计分析，所有数据都以均数±标准差表示，2组间的比较采用t检验，多组之间比较采用one-way ANOVA，P＜0.05认为差异有统计学意义，P＜0.01为有显著统计学差异，P＜0.001为有极其显著的统计学差异。 结果: 在AngⅡ灌注前4组的基础血压没有统计学差异，AngⅡ灌注后3天血压开始升高，在第3周达到峰值，持续至第4周，并且心脏超声和心肌肥厚标志物:ANP、BNP、Collagen InRNA的检测表明高血压心肌肥厚建模成功，其中IL-12p35-KO+AngⅡ组收缩压(systolic blood pressure，SBP)、HW/BW较WT+AngⅡ组明显升高，并且有统计学意义。HE、Masson染色反映了AngⅡ微量渗透泵持续灌注的小鼠，心肌纤维化、炎症细胞浸润明显、心肌细胞肥大、排列紊乱，肌纤维断裂，细胞核畸形、空泡样变较显著，其中IL-12p35-KO+AngⅡ组较WT+AngⅡ组明显，并且有统计学意义。持续的AngⅡ微量渗透泵灌注增加了CD3、CD68的表达。IL-12p35基因的缺失使自噬反应增强，并且促进了JAK2/STAT4信号通路的磷酸化，而AngⅡ微量渗透泵灌注加重了自噬反应和JAK2/STAT4信号通路的磷酸化。经过AngⅡ微量渗透泵灌注后的小鼠，WT+AngⅡ组小鼠心肌组织中IL-12p35mRNA表达较WT组明显升高。 结论: 通过AngⅡ微量渗透泵灌注建立了高血压心肌肥厚小鼠模型，研究表明IL-12p35基因的缺失可以促使血压更高，增大HW/BW，加重炎症浸润、心肌细胞肥大、排列紊乱、肌纤维断裂、细胞核畸形、空泡样变和自噬水平，同时也可以激活JAK2/STAT4信号通路的磷酸化，并且WT+AngⅡ组小鼠心肌组织中IL-12p35mRNA表达较WT组明显升高。说明IL-12p35基因不仅参与了AngⅡ诱导的高血压心肌肥厚的病理过程，而且还具有抑制炎症和调控自噬的效应，并且这些生物学效应可能是由JAK2/STAT4信号通路介导的。由此可见IL-12p35可能成为防治高血压所致心肌肥厚的新靶点。
高血压心肌肥厚;炎症因子;细胞自噬;白介素-12p35基因;病理机制
河北工程大学
硕士
心血管内科
常超
2018
中文
R542.202
42
2018-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）