ILF2低表达下调CENPE抑制乳腺癌细胞增殖的机制研究
背景:近年来，随着生活方式的改变，工作生活压力的逐渐加大，乳腺癌已成为女性恶性肿瘤死亡的主要原因。过去，临床医生根据恶性肿瘤的大小、侵袭程度、是否有淋巴结转移或有无发生远处转移等情况确立了肿瘤的TNM分期，以此帮助医生们判断肿瘤的情况从而帮助判断所采取的治疗方案。根据不同的肿瘤分期，临床治疗时大多数患者仍旧选择采用“以手术为主，放化疗为辅”的治疗原则。但由于缺乏具有针对性的治疗靶点，综合治疗的效果一直达不到临床医生的期望。因此深入探索针对乳腺癌治疗靶点的研究仍是目前临床研究面临的重要任务。近几年，预测恶性肿瘤发生发展过程中涉及的细胞周期调控因子、致癌基因和肿瘤抑制基因等新型生物标志物逐渐成为研究热点。转录因子白介素增强子结合因子2(Interleukin enhancer binding factor2，ILF2)也称为核因子45(nuclear factor45，NF45)，由位于人1位染色体（1q11-qter和1p11-p12）上的基因编码[1]。ILF2编码的蛋白属于NF-AT（活化的T细胞的核因子）的一个亚基，是一种序列特异性DNA结合蛋白，它能通过抑制mRNA的稳定从而调节细胞的生长，同时也是公认的导致肿瘤发生的因素之一。已有文献报道过ILF2能够促进多种类型癌症的进展[2]。例如，在淋巴瘤、白血病、神经胶质瘤、宫颈癌和食管癌中ILF2均为高表达的，并可能导致癌细胞发生增殖失控的现象[3-7]。更有文献已证实，在胰腺导管腺癌中ILF2的消耗会使细胞周期蛋白E(cyclin E)减少并使细胞核抗原(PCNA)的水平增多，肿瘤组织中ILF2的表达增高可能提示患者预后不良或是临床病理类型不佳[2]。但到目前为止，关于ILF2在乳腺癌中的研究仍未见报道。本论文旨在研究ILF2在乳腺癌细胞中的功能及相关分子机制。 方法:首先利用现有肿瘤相关基因研究数据库（oncomine数据库）查询ILF2在乳腺癌中是否可表达:通过实验检验ILF2在乳腺癌不同细胞系中的表达水平;然后选定一个细胞系作为实验用细胞系，利用siRNA下调乳腺癌细胞中ILF2的表达，用PCR以及免疫印迹Western Blot的方法验证其表达;平板克隆实验和MTT实验检测ILF2下调后乳腺癌细胞的增殖能力是否有改变;划痕实验检测了ILF2敲低后乳腺癌细胞的迁移能力是否不同;接着，通过查阅文献我们发现，下调乳腺癌细胞中ILF2后可能通过CENPE影响细胞的增殖。因此，我们验证了CENPE在乳腺癌不同细胞系中的表达情况;利用siRNA下调乳腺癌细胞中CENPE的表达水平，用PCR以及免疫印迹Western Blot的方法验证其表达;通过平板克隆实验和MTT实验检测CENPE下调后乳腺癌细胞的增殖能力有无变化;划痕实验用来检测CENPE敲低后乳腺癌细胞的迁移能力变化情况。 结果:通过RNA水平及蛋白水平检验我们发现，ILF2在乳腺癌不同细胞系中均为高表达且表达量各不相同。利用siRNA对乳腺癌细胞系MDA-MB-231中ILF2进行下调后能有效抑制乳腺癌细胞中ILF2的表达。同时ILF2下调后也会影响CENPE的表达，使其表达量降低。平板克隆实验和MTT实验的结果显示ILF2下调后乳腺癌细胞的增殖受到明显的抑制。划痕实验结果显示ILF2下调后乳腺癌细胞的迁移能力变化不明显。通过RNA水平及蛋白水平检验我们发现，CENPE在乳腺癌不同细胞系中表达有所不同。利用siRNA对乳腺癌细胞系MDA-MB-231中CENPE进行基因沉默后结果显示siRNA能有效抑制乳腺癌细胞中CENPE的表达。平板克隆实验和MTT实验的结果均显示CENPE下调后能有效抑制乳腺癌细胞的增殖能力。划痕实验结果表明CENPE下调后乳腺癌细胞的迁移能力有所增强。 结论:本论文通过一系列实验证实了，ILF2在乳腺癌细胞中是高表达的。下调ILF2后乳腺癌细胞的增殖能力明显减弱，但对其迁移能力影响并不明显。ILF2敲低后乳腺癌细胞中的CENPE表达量下降，说明ILF2低表达通过下调CENPE影响乳腺癌细胞的增殖。
乳腺癌;转录因子白介素增强子结合因子2;细胞增殖;病理机制
大连医科大学
硕士
外科学
赵海东
2018
中文
R737.9;R730.2
48
2018-08-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）