人母乳源鼠李糖乳杆菌的分离及益生活性初步研究
国内外相关实验发现，人母乳中含有丰富多样的共生菌。这些乳汁中的微生物通过母乳喂养的方式传递给婴儿，从而促进其肠道微生物区系的建立和成熟。因此，从人母乳中筛选获得具有潜在益生性质的益生菌，对明确母乳中益生菌的功效及开发新型益生菌产品具有重要意义。本研究利用高通量测序技术分析两个母乳样品不同时期微生物组成和丰度，对母乳中的乳杆菌进行分离筛选，进一步研究筛选菌株体外益生活性，主要研究结果如下: (1)以河北和北京地区两位顺产产妇产后10天-180天提供的48个母乳样本为材料，采用16S rDNA V3-V4可变区的Illumina高通量测序技术方法，研究了48个母乳样本微生物组成和丰度进行分析，主要研究结果为:河北产妇母乳样品鉴定出微生物隶属于40个门，北京产妇母乳样品微生物隶属于25个门，两组样品共鉴定出41个门，含量较高的有13个门，其中厚壁菌门（Firmicutes）、变形菌门（Protro bacteria）的含量最多，为优势菌门。在属水平上，河北产妇母乳样品鉴定出微生物隶属于665个属，北京产妇母乳样品微生物隶属于401个属，两组样品共鉴定出701个属，共有属为365个，含量较高的属为芽孢杆菌属(Bacillus)、乳球菌属(Lactococcus)、肠球菌属(Enterococcus)均是两组样本中的优势菌群，48个母乳样品均检测到乳杆菌属(Lactobacillus)，含量在0.1％左右，产妇生产后第一个月的母乳样品河北组与北京组乳杆菌属含量为0.04％和0.06％;第二、三个月两个母乳乳杆菌属含量均有所增加，分别为0.3％和0.13％;第六个月时，乳杆菌属含量又降低到0.07％和0.04％。 (2)利用乳酸菌产酸特性，对母乳样品中的乳杆菌进行分离筛选。对筛选菌株进行形态学记录观察、生理生化试验及16S rDNA序列鉴定，结果在16株产透明圈疑似菌株中共分离得到一株镜检为革兰氏阳性，短杆状，无芽孢;生理生化特性符合鼠李糖乳杆菌的基本特征;16S rDNA序列及进化树分析进一步确认该菌株为鼠李糖乳杆菌，并命名为鼠李糖乳杆菌Z5菌株(Lactobacillus rhamnosus Z5)。 (3)以筛选得到的菌株为原料，采用体外模拟人胃肠道环境，对鼠李糖乳杆菌Z5进行了耐受性评价，在pH3.0的条件下模拟人工胃肠液共消化6h后该菌存活率达90％以上，在0.15g/L胆盐质量浓度培养6h，菌株存活率达76.14％;抑菌试验发现，菌株培养液对沙门氏菌及大肠杆菌两种常见致病菌的生长有较优的抑制效果。细胞黏附试验发现，该菌株可有效黏附到Caco-2细胞表面，对Caco-2细胞的平均黏附数为7.54×105cfu/mL。 从人母乳中获得了这株具有潜在益生性质的鼠李糖乳杆菌，为明确母乳中益生菌的功效及开发新型益生菌产品研究提供了良好的实验材料。
人母乳源鼠李糖乳杆菌;菌株分离;益生活性
河北农业大学
硕士
食品科学
张志胜
2017
中文
Q939.123
69
2018-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）