RPA等温扩增技术在转基因玉米检测中的应用
随着转基因技术的不断创新，越来越多新型转基因产品相继问世。转基因玉米在产量、品质等方面得到了提高，作为重要的粮食和饲料作物，从1996年到2016年间全球转基因玉米种植面积从30万公顷增加到了6060万公顷。于此同时，社会公众对于转基因玉米的关注度也在不断地提高，各国相继出台了法律法规对转基因玉米等转基因作物进行监管。为了加强转基因玉米的安全管理，保护消费者大众的权益，迫切需要对于转基因玉米建立快速检测新方法。传统检测方法以PCR技术为主，但由于PCR技术本身存在反应时间久、成本高、对实验环境要求高、程序繁琐等缺点，越来越多的研究开始放眼于恒温快速检测上。恒温检测技术不但摆脱了变温仪，而且在保证检测结果准确的前提下，极大的缩短了反应时间。RPA(recombinase polymeraseamplification)等温扩增技术是在重组酶介导下模拟细胞的DNA复制过程，在体外进行核酸等温扩增的新技术。在37-42℃间，20分钟内就可以对含有靶标序列的样品进行扩增，在配备便携式RPA检测仪器能实现转基因玉米的田间快速检测。到目前为止，我国已经批准的转基因玉米包括3272、59122、Bt176、Bt11、GA21、MIR162、MIR604、MON810、MON863、MON88017、MON89034、NK603、T25和TC1507，本实验以上述转基因玉米品系为实验材料，旨在建立一批转基因玉米品系特异性RPA荧光检测方法，主要研究内容以及结果如下: 1.建立了转基因玉米RPA荧光检测方法。本研究根据每种转基因玉米外源插入片段侧翼序列设计引物和探针，通过筛选得到最优探针以及引物对建立RPA荧光检测方法。已建立了包含Bt11、Bt176、TC1507、MON810、MON863和MON89034在内的6种转基因玉米的RPA荧光检测方法，占已批准转基因玉米43％。上述材料的RPA荧光检测方法具有很高的灵敏性与特异性，可在20分钟产生检测结果，检出限可达到到50个拷贝。此结果为转基因玉米快速检测提供了方法支撑。 2.建立了转基因玉米TC1507和MON89034双重RPA荧光检测方法。本研究以转基因玉米TC1507以及MON89034为对象，在上述中的RPA荧光检测方法的基础上，建立了双重RPA检测方法，同时对混合样品中的TC1507以及MON89034进行检测。结果显示，RPA荧光检测方法可以对这两种转基因玉米进行双重检测。灵敏度方面，可以在500拷贝TC1507以及50拷贝MON89034混合样品中同时检测得到扩增曲线。
转基因玉米;等温扩增;转基因检测;RPA荧光检测
中国农业科学院
硕士
生物化学与分子生物学
宛煜嵩
2017
中文
S513
59
2018-01-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）