汉本泊芬的临床前药代动力学研究
肿瘤光动力治疗药汉本泊芬是有前途的新型光敏剂，具有结构明确、纯度高、光敏化力作用强以及对肿瘤组织杀伤力强等优势。汉本泊芬的环状四吡咯结构使其具有较强的紫外吸收，因此本课题建立了 HPLC-UV方法，并研究了汉本泊芬的临床前药代动力学，对今后的临床研究具有重要意义。 一、生物样品中汉本泊芬分析方法的建立 本实验建立和验证了HPLC法分析和测定生物样品中汉本泊芬的浓度。色谱分析采用DiamonsilC18(2)(5mm，100×4.6mm)色谱柱，以甲醇、醋酸铵水溶液及不同比例的冰醋酸为流动相，400nm作为紫外检测波长。生物样品中其他物质不干扰样品测定。方法学验证结果表明，在各自的标曲范围内，r2＞0.996，说明线性良好。各分析方法的日内精密度以RSD表示，均在1.24～10.90％范围内，日间精密度(RSD)为1.34～6.88％，准确度为82.76～114.20％。该方法成功用于汉本泊芬的SD大鼠和Beagle犬的药代动力学研究。 二、汉本泊芬在SD大鼠体内的临床前药代动力学研究 SD大鼠单剂量(0.5、1和2mg/kg)静注给药汉本泊芬粉针剂后，按照实验方案设计的不同时间点取血，用已建立的HPLC法测定汉本泊芬在SD大鼠体内的血药浓度，绘制血浆药物浓度一时间曲线。药物动力学参数依据非房室模型推算而得。经非房室模型法估算的SD大鼠单剂量静注汉本泊芬粉针剂低、中、高三个剂量组后达峰浓度Cmax分别为:11526.02±1619.60、22439.22±2456.47、49194.70±3681.64 ng/mL; AUC0～72分别126454.05±69247.20、468230.68±126316.13、518282.36±254975.92 ng·h/mL。结果表明，单剂量静注汉本泊芬粉针剂后SD大鼠体内血药浓度以较慢的速度消除，且没有显示出个体差异。AUC0～72、Cmax与给药剂量基本呈正相关，相关系数r2分别为0.5441、0.9737，符合线性药代动力学特征。 每天给药一次的多剂量试验，第四天起体内汉本泊芬的浓度基本上达到稳态，通过分析对比单剂量和多剂量给药的药代动力学参数可以看出，连续给药七天后汉本泊芬在SD大鼠体内有轻微蓄积。 三、汉本泊芬对SD大鼠的组织分布研究 SD大鼠单剂量尾静脉注射1mg/kg汉本泊芬粉针剂后，本实验设定30min、2h、4h、8h、24h、48h等时间点处死，在给药前和给药后不同时间点取心、肝、脾、肺、肾、胃、脑、皮肤、脂肪、肌肉、肠、睾丸、卵巢、子宫等组织，用生理盐水清洗干净后用滤纸吸干，将处理好的组织样品避光低温（-80℃）保存待测。测定时，按组织样品前处理方法处理，采用HPLC-UV法测定各组织药物浓度。实验结果表明，汉本泊芬在肺、卵巢、心中浓度最高，肝、肾、脾、子宫、睾丸次之，胃、肠很少，脑、脂肪、皮肤、肌肉中极少且含量低于定量下限。 四、汉本泊芬在Beagle犬体内的临床前药代动力学研究 Beagle犬五个单剂量组(0.3 mg/kg、0.6 mg/kg、1.2 mg/kg、2.4 mg/kg和4.8mg/kg)分别左前肢静注汉本泊芬粉针剂适量后，按照实验方案中设定的时间点取血。用已建立的HPLC法测定汉本泊芬在Beagle犬体内的血药浓度，绘制血浆药物浓度一时间曲线。药物动力学参数依据非房室模型推算而得。经非房室模型法估算的Beagle犬单剂量静注给药汉本泊芬粉针剂以上五个剂量组后达峰浓度Cmax分别为:1637.64±702.16、4061.22±469.85、9491.22±1217.44、22693.25±1450.23和47316.47±2827.02ng/mL;AUC0～6分别为121.51±54.69、220.49±47.97、1114.03±222.42、2285.16±327.47和7517.85±2137.48ng.h/mL。结果表明，Beagle犬单剂量静注给药汉本泊芬后体内血药浓度消除较快，基本无个体差异;AUC0～6、Cmax与给药剂量基本呈正相关，符合线性药代动力学特征，相关系数r2分别为0.8787、0.9919。Beagle犬多剂量静注给药汉本泊芬1.2mg/kg后第四、五、六、七日汉本泊芬的谷浓度均低于检测的最低定量限。多剂量结果显示不产生蓄积效应。 五、汉本泊芬在人、鼠、犬不同种属的血浆蛋白结合率研究 本试验采用HPLC法测定血浆中药物总浓度及游离药物浓度，应用平衡透析法测定蛋白结合率。实验结果显示，汉本泊芬的人、Beagle犬和SD大鼠在低中高三个浓度(2.5μg/mL、10μg/mL和40μg/mL)的血浆蛋白结合率平均值范围分别为84.07～94.64％、86.18～89.65％、84.57～93.31％。汉本泊芬血浆蛋白结合率均大于80％，无浓度依赖性。
汉本泊芬;高效液相色谱法;临床前药代动力学;组织分布;血浆蛋白结合率;动物模型
中国人民解放军海军军医大学;第二军医大学
硕士
药学
周婷婷
2017
中文
R969
102
2017-09-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）