脂肪酶的生物制备以及复合脂肪酶系的筛选
在自然界中脂肪酶不但可以进行脂类的水解还能催化酯化反应的进行。因此可以以地沟油或工业废油和低碳醇为原料用来合成生物柴油。而将脂肪酶进行有效的固定化方法，可以增强脂肪酶的稳定性和回收效率，以达到脂肪酶的有效利用。本文旨在对脂肪酶进行生物制备并对脂肪酶进行筛选，筛选出有增强效果的复合脂肪酶系，为多层、定向、比例可控模式的新型复合脂肪酶固定化方法提供脂肪酶选择的基础。 本实验以毕赤酵母为表达载体，对假丝酵母Candidasp.99-125脂肪酶，南极假丝酵母脂肪酶以及米氏根酶脂肪酶共计18种脂肪酶进行生物制备。并以对硝基苯基棕榈酸酯为底物测定脂肪酶对长链脂类的水解能力，对硝基苯基月桂酸酯和对硝基苯基辛酸酯测定脂肪酶对中链脂类的水解能力，对硝基苯基丁酸酯测定脂肪酶对短链脂肪酶的水解能力。筛选出具有水解优势的脂肪酶。以油酸、棕榈酸、月桂酸、辛酸分别与甲醇进行酯化反应，测定脂肪酶的酯化活性，将水解活性最高脂肪酶与酯化活性最高脂肪酶组成复合酶体系，并测定其组合体系的复合效果。并通过设计与磁球表面所连的支架蛋白相匹配的锚定域达到固定化的效果。最终实验结果表明:米式根酶脂肪酶Rd对长链、中链、短链脂类都具有很好的水解活性。而南极假丝酵母脂肪酶CALB对酯化脂肪酸的中长链反应有很好活性，而复合酶系在两者组合形成的情况下也能在中短链脂肪酸的酯化反应中具有复合增强效果。
脂肪酶;生物制备;复合酶体系;固定化筛选
北京化工大学
硕士
药学
范立海
2017
中文
TQ925.6
91
2017-08-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）