含苯硼酸结构的纳米粒子制备及其对蛋白质检测的应用研究
蛋白质广泛存在于体液中，可作为象征人体健康的标准，用作诊断的生物标记物。将被测蛋白质的对应识别分子引入检测体系，可作为响应机制的触发点。本文引入蛋白质诱导纳米粒子亲疏水性变化机制作为分子识别，疏水片段硼酸基团与ARS络合反应为信号导出，构建蛋白质检测机制。 1.本文用点击化学反应合成末端具有生物素的大分子链转移试剂，通过可逆加成-断裂链转移聚合(RAFT聚合)调节投料比例，得到聚苯硼酸丙烯酰胺(PAAPBA)为疏水片段的三种不同嵌段比例的两亲性聚合物(Biotin-PEG-block-PAAPBA)。通过疏水相互作用，两亲性聚合物自组装形成100～300nm的纳米粒子，利用被识别蛋白质与纳米粒子外壳的识别分子结合，从而产生粒子整体亲疏水性平衡变化，粒子松散而使苯硼酸部分裸露，进而与ARS形成荧光生色团，作为检测信号导出方式，利用此纳米粒子检测模型蛋白链霉亲和素，检测限(LOD)可达32.50ng·mL-1。 2.基于上述方案已实现的定量检测，本文进一步优化检测体系，建立可视化定性检测新机制。两亲性嵌段聚合物(B iotin-P EG-b lock-PAAPBA)与ARS先配位反应后，自组装可以形成黄色纳米粒子。在蛋白质影响粒子亲疏水性平衡的同时，引入环糊精分子作为外加刺激，并与疏水内核的硼酸-ARS络合物反应，竞争置换出游离的紫色ARS，促进粒子进一步瓦解，实现溶液颜色由黄到紫的转变。根据加入蛋白质的纳米粒子溶液与无蛋白质纳米粒子溶液的荧光发射信号差值作蛋白检测标准曲线，同时实现蛋白质的可视化定性和荧光定量检测，达到的检测限为5.85ng·mL-1，检测线性范围6.50ng·mL-1～1.95μg·mL-1。
蛋白质;分子识别;纳米粒子;苯硼酸结构;点击化学反应
北京化工大学
硕士
药学
杨晶
2017
中文
Q51;Q503
97
2017-08-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）