抗肿瘤蛋白的筛选、鉴定及抗肿瘤多肽的优化设计
肿瘤是影响人类健康的重大疾病之一，目前临床肿瘤药物主要为小分子化疗药物。为进一步发掘并开发蛋白/多肽类抗肿瘤药物，本研究拟从蜂王浆中筛选抗肿瘤活性蛋白;此外，以蝎毒多肽为模板，优化设计抗肿瘤多肽。 分别以喀尔巴阡蜂蜂王浆（简称RJK）和杂交三代新疆黑蜂蜂王浆（简称RJX）为原料，经过初步分离得到蜂王浆水溶蛋白、球蛋白、醇溶蛋白、谷蛋白。经细胞毒性筛选确定醇溶蛋白具有明显的抗肿瘤活性。进一步分离醇溶蛋白得到两种组分，分别为RJE(50kD)和RJF(60kD)。其中，RJF具有明显抗肿瘤活性，而RJE活性不明显。采用Protein identification、MALDI-TOF-MS、Edman降解等方法对RJF进行鉴定、分析，确定RJF为一种新的抗肿瘤活性蛋白。 以课题组前期获得的一条蝎毒多肽衍生的抗肿瘤多肽ZXR-2(FKIGGFIKKLWRSLLA)为模板，设计了四组多肽。第一组和第二组分别用丙氨酸和缬氨酸对序列中异亮氨酸(I)和亮氨酸(L)进行了逐个替换，得到ILA和ILV两个系列多肽。第三组将ZXR-2的序列分别从C端和N端缩短，得到ILC与ILN系列多肽。第四组为以亮氨酸、赖氨酸和丙氨酸设计的模式多肽(LKA系列多肽)。ILA系列和ILV系列在破坏间隔七个氨基酸的I-L氨基酸对后，其抗肿瘤和抗菌活性有明显下降，分析发现其活性与疏水力矩有一定的正相关。乳酸脱氢酶释放(LDH)实验和流式细胞仪分析表明ILA和ILV系列多肽对细胞膜有裂解作用，说明I-L氨基酸对的破坏对多肽的作用机理没有明显影响。多肽序列长度显著缩短的情况下，ILN和ILC系列多肽仍可保持部分活性，有望通过序列的改进一步提高其活性。LKA模式多肽系列没有明显的抗肿瘤活性，将对多肽序列进一步改进。
抗肿瘤活性蛋白;蜂王浆;抗肿瘤多肽;蝎毒多肽
北京化工大学
硕士
药学
陈龙
2017
中文
R979.1
94
2017-08-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）