重组人白介素-2纯化工艺的改进及放大研究
白介素-2作为一种免疫调节的细胞因子。能够促进B细胞的增殖和分化;促使T细胞得快速增殖;可以对NK细胞进行诱导实现其分化以及增殖。目前市售的白介素-2主要以基因工程表达的重组人白介素-2为主;生产工艺主要以基因工程菌为基础，利用生物发酵法配合大规模的分离纯化技术，得到高纯度的重组人自介素-2，制成重组人白介素-2成品。由于目前重组人白介素-2生产工艺及设备产能较小，不能满足市场的需求。为了紧跟市场发展，适应市场需求，对重组人白介素-2的生产情况进行研究，进行产能升级。主要通过对菌体破碎环节进行设备更新，实现菌体破碎的产生升级;并对下游纯化规模进行放大，实现生产工艺的产能提升。 本文的具体研究如下: 1.细胞破碎工艺改进及放大 针对现有破碎工艺处理能力不足的问题，采用高压匀浆破碎仪代替原有工艺，对该工艺中的参数进行了研究，确定了最优的工艺条件为:匀浆压力55MPa，匀浆破碎两遍，初始温度不高于14℃，对整个匀浆过程冷却处理;实验结果显示，菌体破碎率、产品电泳纯度和单位时间的处理量均达到最优;与现有工艺相比，重组人白介素-2的电泳纯度提高了9.2％，温度升率降低了63.7％，单位时间的处理量提高了27倍。 2.凝胶层析工艺放大 研究了层析柱规格对重组人白介素-2纯化效率的影响，确定了层析柱规格为φ20cm×80cm的层析柱，线性流速为0.19cm/min情况下，目标蛋白质的收率、电泳纯度较原工艺保持一致，单位时间的处理量较原有纯化工艺有了提高;与现有工艺相比，单位时间的处理量提高了4倍。 3.复性过程放大 研究了直接稀释复性中，不同复性规模和复性时间对重组人白介素-2复性效果的影响情况。确定了复性体积10L，复性时间5小时为最佳条件，复性后的生物学活性增和单位时间的处理量均有明显提高;与现有工艺相比，电泳纯度保持稳定，生物学活性与比活性均上升了16.8％，单位时间的处理量提高了3.7倍。
重组人白介素-2;细胞破碎工艺;凝胶层析工艺;复性效果;生物活性
北京化工大学
硕士
生物工程
袁其朋;程度胜
2016
中文
TQ464
97
2017-05-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）