Omega-3治疗大鼠干眼的实验研究
干眼是一种常见的眼科疾病，影响人们的生活质量。当前干眼在世界范围内的发病率大约在5.5％到33.7％之间。在美国，流行病学显示干眼的各个年龄阶段的发病率不尽相同，大概从5％到43％之间，随着年龄越大发病率越高。在美国，50岁以上干眼患者大概有491万，其中女性患者323万、男性患者168万。中国流行病学显示干眼发病率大概在21％到30％之间，与亚洲其他国家相比发病率相似，但高于美国及其欧洲国家。 干眼病因繁多，炎症反应、细胞凋亡、性激素水平下降以及外界因素影响是其主要病因，其中炎症在干眼的发病机制中起到重要的作用。无论哪一种类型的干眼都会引起眼表炎症，而眼表炎症又会加重干眼。例如干眼时泪液渗透压升高或是泪膜不稳定引起眼表炎症，眼表炎症反过来影响泪腺细胞的功能甚至导致泪腺细胞凋亡，受损的泪腺细胞引起泪液成分的改变，导致泪液渗透压升高，同时泪腺细胞减少导致泪液分泌量下降，形成一个恶性循环。 由于干眼发病机制复杂，现阶段干眼缺乏有效的治疗。人工泪液和泪小点栓塞只是增加泪液的量起到对症治疗的作用;对睑板腺进行清洁、按摩、热敷，只能改善蒸发过强型干眼的症状;糖皮质激素在一定程度上可以控制炎症，但是它有着严重的副作用;环孢素尽管在长期疗效上比糖皮质激素更适合，但它不是对每个患者都有效。因此寻找新的有效的干眼治疗方法，减轻干眼症状，提高患者的生活质量就显得十分急迫。近期有学者研究发现，口服omega-3可以起到治疗干眼的作用。 目的: 探讨omega-3治疗苯扎氯铵诱导的大鼠干眼的疗效及其可能机制。 方法: 1.实验分组:45只6～8周龄SD大鼠，裂隙灯检查无异常，泪液分泌量及角膜荧光素染色未见异常。采用随机数字表法分为空白组、对照组、实验组。空白组15只、对照组15只、实验组15只。实验组给予omega-3鱼油脂肪乳(含59.1％ omega-3)灌胃，每次1ml，1次/d，连续2月。对照组给予橄榄油灌胃，每次1ml，1次/d，连续2月。空白组给予生理盐水灌胃，每次1ml，1次/d，连续2月。 2.建立干眼模型:2个月后，omega-3组、榄油组、生理盐水组分别接受15天的苯扎氯铵诱导干眼。（选择SD大鼠右眼制作干眼模型，每眼每次滴5μ10.2％苯扎氯铵，每天2次）。建模期间灌胃同前。 3.检测指标:干眼诱导前、干眼诱导后第5天、第10天、第15天行泪液量的测量、泪膜破裂时间和角膜上皮荧光素染色评分。干眼诱导15天后，行大鼠角膜、结膜、睑板腺苏木精-伊红染色病理学检查，Western blot定量检测角膜、结膜、睑板腺组织中肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factorα，TNF-α）表达水平的变化、白介素6（interleukin-6，IL-6）表达水平的变化。 4.统计分析:利用SPSS13.0软件进行统计学分析，所有实验数据以平均值±标准差表示。在4个时间点检测泪液量、泪膜破裂时间和角膜上皮荧光素染色评分，三组间的比较采用单因素方差分析，组间多重比较采用SNK法。P＜0.05为差异具有统计学意义。干眼诱导15天后，Western blot法检测三组间TNF-a、IL-6的表达水平变化，三组间的比较采用单因素方差分析，组间多重比较采用SNK法。P＜0.05为差异具有统计学意义。 结果: 1.omega-3组、橄榄油组，生理盐水组三组间泪液分泌量在干眼诱导前、干眼诱导后第5天、第10天、第15天分别为（11.95±1.45，11.02±1.27，10.96±1.57）;(10.06±1.35，9.89±1.85，9.67±1.74);(9.98±1.27，8.01±1.43，7.89±1.12);（9.56±1.34，5.66±1.41，5.76±1.53）。干眼诱导前、干眼诱导后第5天、第10天比较omega-3组、橄榄油组、生理盐水组三组间泪液分泌量的差异，差异无统计学意义。第15天omega-3组泪液分泌量相比橄榄油组和生理盐水组泪液分泌量明显多，差异有统计学意义(P=0.023，P=0.027)。 2.omega-3组、橄榄油组，生理盐水组三组间泪膜破裂时间在干眼诱导前、干眼诱导后第5天、第10天、第15天分别为（9.72±0.82，9.21±0.69，9.61±0.72）;（9.05±0.94，7.44±0.87，7.20±0.83）;（8.95±1.16，6.47±0.97，6.38±0.72）;（7.73±1.05，4.65±0.95，4.80±0.65）。干眼诱导前、干眼诱导后第5天比较omega-3组、橄榄油组，生理盐水组三组间泪膜破裂时间的差异，差异无统计学意义，第10天、第15天omega-3组泪膜破裂时间相比橄榄油组和生理盐水组泪膜破裂时间明显长，差异有统计学意义(P=0.037，P=0.032);(P=0.024，P=0.020) 3.omega-3组、橄榄油组，生理盐水组三组间角膜荧光素染色评分在干眼诱导前、干眼诱导后第5天、第10天、第15天分别为(0.00±0.00，0.00±0.00，0.00±0.00);(2.38±1.34，2.78±1.51，2.83±1.31);(2.93±1.02，4.49±1.64,4.69±1.05);（3.18±1.04，6.32±1.21，6.37±1.32）。干眼诱导前、干眼诱导后第5天、第10天比较omega-3组、橄榄油组，生理盐水组三组间角膜荧光素染色评分的差异，差异无统计学意义。第15天omega-3组角膜荧光素染色评分相比橄榄油组和生理盐水组角膜荧光素染色评分明显少，差异有统计学意义(P=0.012，P=0.015)。 4.角膜组织病理学:干眼诱导后第15天，omega-3组的角膜组织与正常角膜组织相似，可见:角膜上皮细胞层次正常较扁平，表层细胞不角化，基底细胞排列整齐，基质层无水肿。橄榄油组和生理盐水组的角膜组织与正常角膜组织差异较大，橄榄油组和生理盐水组:角膜上皮细胞层次明显增加，表层细胞不规则缺失，基底细胞排列紊乱，基质层少许水肿。 5.结膜组织病理学:干眼诱导后第15天，omega-3组的结膜组织与正常结膜组织相似，可见:结膜上皮结构完整，排列较规则，结膜上皮细胞增殖不明显，基底层细胞排列整齐，少许炎性细胞浸润。橄榄油组和生理盐水组的结膜组织与正常结膜组织差异较大，橄榄油组和生理盐水组均可见:结膜上皮结构不完整，排列不规则，结膜上皮细胞增生，基底层细胞排列不整齐，可见炎性细胞浸润。 6.睑板腺组织病理学观察:干眼诱导后第15天，omega-3组、橄榄油组和生理盐水组的睑板腺组织与正常睑板腺组织相类似，三组均可见:结缔组织深入实质将腺组织分割成大小不等的小叶。腺泡细胞大小均匀，细胞核大小一致，腺泡内层为柱状上皮细胞，核居基底部，腺管呈一同心圆状，管壁厚度正常。 7.Western blot检测各组间TNF-a表达水平变化 omega-3组、橄榄油组、生理盐水组三组间角膜组织中TNF-a表达水平为(0.34±-0.01，0.913±0.04，0.90±0.04)。omega-3组TNF-a表达量低于橄榄油组TNF-a表达量，差异具有统计学意义(P=0.000);omega-3组TNF-a表达量低于生理盐水组TNF-a表达量，差异具有统计学意义(P=0.000);橄榄油组TNF-a表达量与生理盐水组TNF-a表达量相似，差异无统计学意义。 omega-3组、橄榄油组、生理盐水组三组间结膜组织中TNF-a表达水平为(0.52±0.27，1.44±0.14，1.43±0.33)。omega-3组TNF-a表达量低于橄榄油组TNF-a表达量，差异具有统计学意义(P=0.026); omega-3组TNF-a表达量低于生理盐水组TNF-a表达量，差异具有统计学意义(P=0.037);橄榄油组TNF-a表达量与生理盐水组TNF-a表达量相似，差异无统计学意义。 omega-3组、橄榄油组、生理盐水组三组间睑板腺组织中TNF-a表达表为(2.16±0.66，2.29±0.57，2.39±0.41)差异无统计学意义。 8.Western blot检测各组间IL-6表达水平变化 omega-3组、橄榄油组、生理盐水组三组间角膜组织中IL-6表达水平为(0.38±0.02，1.01±0.07，0.95±0.03)。omega-3组IL-6表达量低于橄榄油组IL-6表达量，差异具有统计学意义(P=0.000); omega-3组IL-6表达量低于生理盐水组IL-6表达量，差异具有统计学意义(P=0.000)。橄榄油组IL-6表达量与生理盐水组IL-6表达量相似，差异无统计学意义。 结论: 1.在苯扎氯铵诱导大鼠的干眼模型中，omega-3能有效抑制泪液分泌量减少、增强泪膜稳定性、保护角膜组织、结膜组织。 2.在苯扎氯铵诱导大鼠的干眼模型中，omega-3能有效降低角膜组织、结膜组织中炎症因子TNF-a、IL-6表达的水平。
干眼;苯扎氯铵;欧美加3;疗效评价
南方医科大学
硕士
眼科学
陆晓和
2016
中文
R591.412.05
63
2017-02-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）