拟南芥ESP、NSP和NPR4蛋白的结构生物学研究
硫苷（芥子油苷）是十字花科植物中一种重要的代谢产物，在一些功能因子，如表皮特异硫蛋白(ESP)、腈特异蛋白(NSP)和硫氰酸盐形成蛋白(TFP)的存在或缺失时，得到的水解产物不同:在TFP存在时可以得到腈、环硫腈和硫代氰酸盐三种产物，ESP存在时产物为腈和环硫腈，而在NSP存在时水解产物只可能得到腈。为了研究硫苷代谢不同产物的产生机制，本文对拟南芥来源的ESP和NSP蛋白进行了X射线晶体学为手段的结构生物学研究。其中ESP蛋白最终获得114个结晶条件，并在0.2M Sodium chloride、0.1M HEPES pH7.5、30％ PEG400条件下获得高质量晶体。通过分子置换方法获得ESP的高分辨率晶体结构。而NSP的结晶筛选正在进行中。结构分析表明，ESP与之前解析的TFP具有相同的结构，但活性位点的氨基酸残基有所不同，使得二者具有不同的底物特异性。我们还进行了ESP潜在底物的分子对接实验，阐明了其底物结合方式。 本文的另一部分内容是关于水杨酸潜在受体蛋白NPR4的表达、纯化与结晶。水杨酸(SA)是目前唯一尚未确定受体的主要植物激素。最新的研究表明NPR1的同源旁系物NPR3和NPR4是SA的潜在受体。我们成功构建了关于NPR4不同片段长度的12个重组子。最终通过多个克隆均获得了NPR4的高纯度蛋白，并最终得到了NPR4(1-574aa)的74个结晶条件。我们主要对其中的MD38-2-21#进行优化得到形态好的晶体，遗憾的是NPR4衍射分辨率很低，还不能满足结构解析的需要。
植物代谢;硫苷;表皮特异硫蛋白;腈特异蛋白;硫氰酸盐形成蛋白
北京化工大学
硕士
药学
冯越
2016
中文
Q945.18
94
2017-01-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）