日蟾蜍它灵对VEGF诱导血管生成影响的研究
目的:日蟾蜍它灵(CS-6)，属于中药蟾酥中所含有的蟾蜍甾烯内酯类化合物。前期研究表明CS-6在抑制肿瘤细胞的生长和炎症反应中具有良好效果。但目前CS-6对血管新生的影响及其潜在的分子机制还了解甚少。本实验主要探讨CS-6抑制VEGF诱导人脐静脉HUVECs细胞的增殖、管形成能力以及血管生成的分子机制。 方法:本实验采用MTT法检测不同浓度日蟾蜍它灵(CS-6)对VEGF诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖的影响;采用划痕实验、Transwell侵袭实验和激光共聚焦免疫荧光方法检测CS-6对VEGF诱导的人脐静脉内皮细胞迁移和侵袭的影响。此外，通过管形成、球状体成芽、小鼠主动脉环等体外实验研究CS-6对VEGF刺激后血管新生的影响;采用基质胶栓实验评估CS-6对VEGF刺激的小鼠体内血管新生的影响。为寻找CS-6的作用靶点，本实验采用分子对接法，在体外模拟CS-6与VEGFR-2的相互作用。利用Western blot、免疫荧光、免疫共沉淀等手段来探索CS-6抑制血管生成的潜在机制。 结果:日蟾蜍它灵(CS-6)在体外实验中显著抑制VEGF诱导的HUVECs细胞增殖、迁移、侵袭和管形成，并且在C57/BL6小鼠体内抑制基质胶栓中血管的形成。本实验采用计算机分子对接模拟以及免疫共沉淀的方法，发现CS-6可以结合到VEGFR-2的ATP结合位点上，阻断ATP与VEGFR-2的结合而不影响VEGF与VEGFR-2的结合，从而降低VEGFR-2的磷酸化水平，抑制其生理活性，继而抑制VEGFR-2所介导的下游信号通路;同时，Western blot检测表明CS-6可以显著抑制由VEGF诱导的VEGFR-2的磷酸化;此外，通过siRNA敲低VEGFR-2，进一步验证了CS-6可以通过抑制VEGFR-2信号通路激活，发挥抑制血管新生的作用。 结论:本研究发现日蟾蜍它灵(CS-6)通过抑制VEGFR-2信号通路的激活而产生抑制血管生成的作用。本研究表明，日蟾蜍它灵在治疗与血管新生相关疾病方面具有潜在的应用价值。
日蟾蜍它灵;药理机制;血管生成;血管内皮生长因子-2
大连医科大学
硕士
药理学
马骁驰
2016
中文
R285.5
57
2017-01-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）