IL-24在非小细胞肺癌患者体内表达特征及其与自噬和转移的关系
研究背景:肺癌是目前全世界导致癌症死亡最高的疾病，其中非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer，NSCLC)约占所有肺癌的80％。大量研究表明白细胞介素24(IL-24)可抑制肿瘤组织血管新生，促进肿瘤细胞凋亡，在肿瘤治疗中具有良好的前景。然而IL-24抑制肿瘤的作用存在选择性。目前为止，IL-24在NSCLC患者体内的表达特征以及与自噬和侵袭转移的关系，国内外均未见相关文献报道。本研究利用NSCLC临床标本结合体外细胞实验，从组织、细胞、分子、基因水平，就IL-24对NSCLC的影响及其作用机制进行了初步探讨，以期为寻找治疗NSCLC新的药物靶点提供理论依据。 第一部分 NSCLC患者IL-24的表达特征及其与自噬、侵袭转移相关蛋白的关联性研究 目的:研究NSCLC患者血清及肿瘤组织中IL-24的含量，分析其与临床病理学因素之间的相关性。研究NSCLC患者肿瘤组织中自噬和侵袭转移相关蛋白LC3，Beclin-1，MMP-9和VEGF的蛋白表达水平，以及与临床病理学因素之间的相关性。进一步分析IL-24分别与LC3，Beclin-1，MMP-9和VEGF之间的关联性。 方法:(1)用Elisa方法检测健康人(n=56)和NSCLC患者(n=58)血清中IL-24的含量，分析患者与健康人血清中IL-24含量的差异，及其与临床病理学因素的关系;(2)采用Real-time PCR检测NSCLC患者正常组织(n=72)和肿瘤组织(n=72) IL-24的mRNA表达;用显微切割法从肿瘤组织中分离出肿瘤细胞(n=16)，Q-PCR检测NSCLC患者肿瘤细胞IL-24的mRNA表达。分析IL-24组织水平和细胞水平mRNA表达与NSCLC患者临床病理学因素之间的关系;(3)采用Western blot方法分别检测IL-24（正常组织n=72;肿瘤组织n=72），LC3（正常组织n=33;肿瘤组织n=33），Beclin-1（正常组织n=72;肿瘤组织n=72），MMP-9（正常组织n=33;肿瘤组织n=33）和VEGF（正常组织n=33;肿瘤组织n=33）在正常组织和肿瘤组织中的蛋白表达水平，分析肿瘤组织中这些蛋白的表达水平与患者临床病理学因素之间的相关性，并分析IL-24与自噬相关蛋白LC3，Beclin-1，侵袭转移相关蛋白MMP-9，VEGF之间的关联性;(4)采用免疫组化法对NSCLC患者病理组织芯片进行IL-24和LC3免疫组化染色和评分(n=92)。进一步分析IL-24和LC3在患者肿瘤组织的蛋白表达与临床分期的关系，及IL-24与LC3之间的关联性。 结果:(1) NSCLC患者血清中IL-24含量明显高于健康人，且与TNM分期(ⅠA-B→ⅢA-B)呈正相关;(2) NSCLC患者肿瘤细胞中IL-24 mRNA的表达与T分期(T0→T3)呈负相关;(3) NSCLC患者肿瘤组织中IL-24，LC3和Beclin-1均显著高于正常组织;鳞癌组织中IL-24表达水平高于腺癌;IL-24蛋白表达与肿瘤分化程度、N分期有关;MMP-9表达与TNM分期（ⅠA-B→ⅢA-B）、T分期(T0→T3)呈正相关;VEGF表达与TNM分期(ⅠA-B→ⅢA-B)正相关;IL-24与Beclin-1、LC3呈正相关;LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ与MMP-9呈负相关;IL-24和LC3高表达患者生存期延长。 结论:患者IL-24血清含量、肿瘤细胞中IL-24的mRNA水平及组织蛋白表达水平可能与NSCLC肿瘤的进展有关;IL-24抑制NSCLC肿瘤的侵袭转移可能与上调细胞自噬水平，抑制MMP-9和VEGF表达有关。 关键词:IL-24; NSCLC患者;肿瘤分期;自噬;侵袭转移 第二部分 IL-24对A549细胞的自噬诱导作用及侵袭迁移的影响 目的:从细胞水平验证IL-24与自噬和侵袭转移的关系，初步探讨IL-24抑制NSCLC侵袭转移可能的机制。 方法:用MTT法观察重组腺病毒IL-24转染的NSCLC细胞株A549的生长曲线;Western blot法分别检测重组腺病毒IL-24和LC3-GFP转染A549细胞后IL-24，LC3，MMP-9和VEGF表达情况;利用划痕实验和Transwell实验分别观察Ad-IL-24和LC3-GFP转染的A549细胞的侵袭转移情况。 结果:(1)大剂量转染IL-24，后A549细胞的增殖受到抑制;(2) A549细胞分别过表达IL-24和LC3，以及A549细胞无血清培养诱发自噬后，IL-24和LC3具有相似的调节趋势;(3)A549细胞过表达IL-24可降低VEGF和MMP-9的蛋白表达;A549细胞分别过表达一定量IL-24和LC3后其运动能力较对照组有所下降，穿过基膜细胞数量也明显减少。 结论:IL-24与LC3相互诱导，下调MMP-9和VEGF的表达，抑制A549细胞的侵袭转移。
非小细胞肺癌;白细胞介素-24;LC3蛋白;自噬现象;转移作用
苏州大学
博士
药理学
梁中琴
2016
中文
R734.2;R730.3
94
2016-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）