DOX和CA4P共载mPEG-PLA聚合物囊泡的制备及其肿瘤抑制作用研究
阿霉素(DOX)是一种强效抗肿瘤药物，但因其缺乏肿瘤靶向性、毒副作用大，且易产生多药耐药(MDR)，临床应用受到很大限制。康普瑞丁A4磷酸酯(CA4P)在1/10最大耐受量(MTD)的剂量下就可以选择性地产生抗肿瘤血管作用，但存在体内消除快、抗肿瘤作用不彻底的问题。鉴于此，我们构建了聚乙二醇单甲醚-聚乳酸(mPEG-PLA)囊泡，共同包载DOX与CA4P，以期通过增强渗透与滞留(EPR)效应使DOX与CA4P同时被动靶向于肿瘤组织，降低药物毒副作用，并着重考察DOX与CA4P共载后对提高肿瘤抑制率及逆转耐药的影响及作用机制。 课题研究工作分为以下三部分: 第一部分，采用开环聚合反应合成了不同亲/疏水链段比例的两亲性嵌段共聚物聚乙二醇单甲醚-聚乳酸(mPEG-PLA)，并优选出具有合适fEO、能自组装形成囊泡，且具有较好载药能力的载体材料mPEG114-PLA162。采用溶剂蒸发法制备了空白聚合物囊泡及DOX和CA4P共载聚合物囊泡(Ps-DOX-CA4P)，并对其形态、粒径、包封率及释放行为进行了考察。结果显示，空白自组装体外观呈类球形，形态规整，粒径约为50nm，具有较大的亲水内核，外周由约10nm的疏水层环绕，显示出典型的囊泡结构。Ps-DOX-CA4P具有与空白囊泡类似的大小及形态，能够共载DOX和CA4P，DOX的包封率大于90％，CA4P的包封率大于50％。药物释放的实验结果表明，DOX的释放速度略慢于CA4P。 第二部分，以KB细胞为模型，考察了Ps-DOX-CA4P对肿瘤抑制的协同增效作用。MTT实验结果显示，空白聚合物囊泡无明显的细胞毒性，而Ps-DOX-CA4P与CA4P单载囊泡(Ps-CA4P)或DOX单载囊泡(Ps-DOX)相比，细胞毒性明显增加。建立裸鼠KB细胞移植瘤模型，考察聚合物囊泡的体内分布及药效。结果显示，聚合物囊泡所载的DOX在肿瘤组织的分布明显高于游离药(p＜0.05)，说明聚合物囊泡能够提高DOX在肿瘤组织的蓄积。Ps-CA4P能快速抑制肿瘤的生长，但作用短暂，Ps-DOX起效慢而作用持久，两者共载的囊泡Ps-DOX-CA4P(1∶10)既能迅速起效，又能持续维持抗肿瘤的药效，抑瘤作用显著提高。CD31和Ki67免疫组化实验也显示，DOX与CA4P共载后，不仅能迅速破坏肿瘤血管，而且能持续抑制肿瘤细胞的增殖，产生协同抗肿瘤作用。 第三部分，以阿霉素耐药MCF-7/ADR细胞为模型，通过细胞毒实验、细胞凋亡实验、DOX的细胞摄取、ATP酶的活性测定、细胞内ATP测定、胞内ROS测定及体外肿瘤球等实验研究，探讨了Ps-DOX-CA4P逆转耐药的作用机制。结果表明，Ps-DOX-CA4P能提高DOX对MCF-7/ADR细胞的细胞毒性和细胞凋亡率、促进MCF-7/ADR细胞对DOX的摄取、激活ATP酶的活性、降低细胞内ATP、提高细胞内的ROS，最终抑制了药物外排泵P-gp的功能而逆转耐药。同时，通过体外肿瘤球实验发现，Ps-DOX-CA4P能明显促进DOX渗透进入肿瘤球并且抑制肿瘤球的生长，提示Ps-DOX-CA4P有望在动物体内逆转P-gp介导的肿瘤耐药，增加化疗药的敏感性。
聚合物囊泡;肿瘤抑制;阿霉素;康普瑞丁A4磷酸酯;肿瘤组织;逆转耐药
浙江大学
博士
药剂学
邱利焱
2014
中文
R979.1;R943
130
2016-09-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）