糙皮侧耳与酿酒酵母原生质体电融合条件的研究
糙皮侧耳（Pleurotus ostreatus）又名平菇，是一类与木质素降解酶有关的白腐真菌。因其适应性强，易于栽培，广泛分布于全球各地，是目前世界上栽培面积大，产量高的食用菌之一。平菇富含蛋白质、膳食纤维、多糖、维生素和矿物质等多种营养成分，具有热量低、脂肪少、钠离子少等优点，被认为是首选的食用佳品。平菇还具有很强的木质素降解能力，能弥补木质素降解模式菌—黄孢原毛平革菌只降解木材中木质纤维素的不足，可广泛应用于作物秸秆等木质纤维素降解系统中。酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）其生长速度快，繁殖能力强，代谢产物有丰富的优质蛋白、B族维生素和矿物质。 木质素是构成植物细胞壁的主要成分，是影响动物消化植物性饲料的关键所在。白腐真菌是迄今发现降解木质素最有效的微生物，也是经常用于木质素降解研究的模式菌株。但在自然状态下，由于白腐真菌的定植缓慢，很难形成优势种群，其要求的发酵条件较严格，目前大多数的研究还仅限于实验室的小试阶段。 本研究选用白腐真菌中有很强木质素降解能力的糙皮侧耳和生长速度快、代谢产物有丰富的优质蛋白、B族维生素和矿物质的酿酒酵母的原生质体为亲本，采用双亲灭活标记方法通过L16(45)正交试验研究交变电压、交变电场频率、脉冲场强、脉冲个数和脉冲间隔对两亲本电融合率的影响，并利用颉颃试验和菌丝形态学比较方法对再生菌株进行筛选和RAPD(random amplified polymorphicDNA)分子标记方法对疑似融合株进行鉴定，力争获得生长较快并能有效降解木质素的新菌株。结果表明: 糙皮侧耳原生质体最佳热灭活条件为:60℃水浴处理10 min。 酿酒酵母原生质体最佳紫外灭活条件为:15W紫外灯20 cm处，垂直照射230 s。 糙皮侧耳和酿酒酵母原生质体的最佳融合条件为:交变电压30 v，交变电场频率1100 kHz，脉冲场强6kv/cm，脉冲个数4个，脉冲间隔10μs，融合率达到4.396×10-5，筛选出的3株疑似融合株皆为亲本原生质体融合的产物。融合株S、T和G5与糙皮侧耳的相似系数均大于与啤酒酵母的相似系数，说明3个融合株与糙皮侧耳亲缘关系较近，其中G5与糙皮侧耳亲缘关系最近。所得融合株均为双亲本融合所得。
糙皮侧耳;酿酒酵母;原生质体;电融合
天津师范大学
硕士
遗传学
范寰
2016
中文
S646.14
61
2016-08-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）