Cuta基因敲除小鼠的构建与表型研究
阿尔茨海默症(Alzheimer's disease，AD)的一个主要病理特征是神经元外β-amyloid(Aβ)聚集形成的淀粉样斑，Aβ级联假说是AD发病机制的主流学说。β-淀粉样蛋白前体蛋白(β-Amyloid Precursor Protein，APP)经β-分泌酶(β-site APPcleaving enzyme1，BACE1)和γ-分泌酶的顺序剪切后生成大量的Aβ40和少量的Aβ42，但Aβ，特别是Aβ42具有神经毒性，可以导致神经退行死亡。BACE1是APP水解的限速酶。我们实验室之前的研究发现人源铜相关蛋白（CutAdivalent cation tolerance homolog of E.coli，CUTA）通过与BACE1的相互作用，介导其在胞内的定位，从而调控APP的水解途径和Aβ的生成。哺乳动物的CUTA可能参与铜的调控，而金属离子铜在AD的发病过程中也起着重要作用。因此，对于CUTA的功能研究，将有助于揭示AD的致病机理。 本研究中，我们应用TALEN技术构建了Cuta基因敲除小鼠。该小鼠缺失8个蛋白编码碱基，导致移码突变。我们建立了应用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定Cuta基因敲除小鼠的方法。进一步实验发现纯合的Cuta基因敲除小鼠可以存活，而且其出生率符合孟德尔遗传定律，性别比例平衡，并且体重无明显改变。我们对三月龄Cuta基因敲除小鼠与认知记忆和情绪相关的行为学进行了研究，包括旷场实验、Y迷宫、高架十字迷宫、强迫游泳等，但没有发现Cuta基因敲除对小鼠行为有明显影响。而且我们发现三月龄Cuta基因敲除小鼠的大脑皮层和海马区域与认知功能相关的突触蛋白、乙酰胆碱酯酶和APP剪切酶含量没有显著改变。虽然体外研究报道人源CUTA2能加强铜离子诱导的细胞凋亡，但我们的结果显示鼠源Cuta基因敲除并不影响铜离子诱导的细胞凋亡。总而言之，我们构建了Cuta基因敲除小鼠，为进一步研究CUTA的生理和病理功能奠定了基础。
阿尔茨海默症;人源铜相关蛋白;基因敲除;致病机理
厦门大学
硕士
微生物学
许华曦;张云武
2015
中文
R749.160.2
66
2016-06-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）