宫内暴露邻苯二甲酸二环己酯对胎儿型睾丸间质细胞的作用
睾丸间质细胞作为雄性体内最主要的雄激素来源，其发育过程及功能受到了各种环境因素的影响。邻苯二甲酸二环已酯(DCHP)是塑化剂的一种，广泛应用于橡胶，树脂，聚合物，包括硝酸纤维素，聚醋酸乙烯酯和聚氯乙烯，增加其稳定性。 实验目的:研究塑化剂邻苯二甲酸二环已酯(DCHP)对大鼠胎儿型睾丸间质细胞的分布、功能以及睾丸的发育的影响以及其机制。 实验方法:购买成年雄性大鼠和雌性大鼠，待其交配成功后记为母鼠怀孕第1天，从母鼠怀孕第12天到21天内分别用玉米油（作为对照）和DCHP(10、100、500和1000 mg/kg)进行灌胃。1）系统毒性，母鼠怀孕至21.5天仔鼠出生，称量雄性仔鼠的体重研究其对雄性仔鼠的系统毒性，计算雄性及雌性仔鼠的出生率比，研究DCHP对雄/雌性仔鼠的出生比值的影响;测量雄性仔鼠肛门生殖器距离(AGD)，统计其生殖系统发育障碍的比率;2）用RIA对新生雄性仔鼠睾丸睾酮激素进行测量;3）免疫组化着色结蛋白对局部睾丸功能障碍的频率进行统计;4）HE染色(HE)及多核生殖母细胞（MNGs）研究DCHP对多核生殖母细胞的影响;5)3β-羟基类固醇脱氢酶(HSD3B1)酶染胎儿型睾丸间质细胞，统计胎儿型睾丸间质细胞的数量、聚集和分布情况;6）HSD3B1免疫组织化学染色标记的胎儿睾丸间质细胞，测量胎儿型睾丸间质细胞的细胞核大小、细胞质大小、核/质进行比较;7）应用Q-PCR技术对睾酮生成相关基因如黄体生成素受体(Lhcgr)，胆固醇运送基因包括胆固醇LDL受体(Scarb1)和类固醇合成急性调节蛋白(Star)，类固醇合成酶的基因包括胆固醇侧链裂解酶CYP11A1(Cyp11a1)、HSD3B1(Hsd3b1)、P450-17α羟化酶P450C17(Cyp17a1)和17β羟基类固醇脱氢酶Ⅲ型HSD17B3(Hsd17b3)以及胰岛素样3因子INSL3(Insl3)等相关基因的表达水平进行测定;8）应用半定量免疫组织化学染色对睾丸间质细胞特异性蛋白CYP11A1、HSD3B1和INSL3等蛋白水平的表达量进行测定;9）应用统计软件GraphPad对数据进行统计分析，值表示为平均值±标准误，且数据用单因素方差分析进行分析。 实验结果:1）不同剂量的DCHP未影响仔鼠的出生率，每个母鼠生产的仔鼠的数目以及雄/雌出生率的比值不变，但雄性仔鼠的体重在DCHP剂量≥10mg/kg组已表现出明显下降;2）睾丸睾酮水平随DCHP剂量的增加呈现降低的趋势，并且在DCHP剂量为500和1000mg/kg时出现显著差异;3）DCHP剂量依赖性地增加多核生殖母细胞(MNGs)和局部睾丸功能障碍的频率，并观察到最低有害作用剂量(LOAEL)为100 mg/kg，而1000mg/kg DCHP组MNGs出现率高达5/6;4）DCHP呈剂量依赖性地增加胎儿型睾丸间质细胞聚集，LOAEL10 mg/kg即可减小胎儿型睾丸间质细胞、胞浆及细胞核大小。但是，每个睾丸间质细胞的总数目未见明显差异;5）DCHP剂量依赖性地抑制HSD3B1的表达，最低抑制有效浓度为10mg/kg，DCHP剂量达500mg/kg还会对Lhcgr、Star、 Cyp11a1、Hsd3b1和Cyp17a1等基因的表达产生明显抑制，但对Scarb1的表达没有影响;6）睾丸HSD3B1和INSL3蛋白均下降，但体内DCHP暴露未见对CYP11A1蛋白的表达有明显影响。 实验结论:宫内DCHP暴露会对胎儿型睾丸间质细胞睾酮生成相关基因、睾丸间质细胞的大小、分布产生影响，更为重要的是影响睾酮生成的能力。
邻苯二甲酸二环已酯;胎儿型睾丸间质细胞;分布规律;睾丸发育
温州医科大学
硕士
麻醉学
连庆泉
2015
中文
R994.3
38
2016-03-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）