PPARα对巩膜Ⅰ型胶原调控及其在近视形成过程中的作用
目的: 近视是发病率高的屈光不正，但其发病机制未明。研究已发现眼内过氧化物酶体增殖激活受体α(PPARα)含量减少可导致眼轴延长以及近视形成，但其作用部位、机制和方式均未明。进一步在近视豚鼠模型中的研究发现PPARα与近视模型具有相关性。通过PPARα的激动剂非诺贝特可以抑制形觉剥夺的豚鼠的近视程度。我们利用RNA-sequence发现形觉剥夺近视小鼠巩膜内PPARα及其下游调控的靶基因表达均有减少，PPARα激动剂Fenofibrate能够抑制人巩膜成纤维细胞中胶原的合成。本实验通过研究小鼠近视模型及PPARα基因敲除的小鼠模型，研究PPARα在近视中的变化以及胶原合成的改变。 方法: (1)采用出生后21日龄的野生型（willdtype，WT）雄性近交C57BL/6小鼠为实验动物。将经过屈光等参数筛选出的X只小鼠随机分为形觉剥夺组（FDM组）和正常组（Control组），通过单眼形觉剥夺建立小鼠近视模型，研究PPARα与近视的关系以及胶原蛋白的变化情况。通过实时定量PCR，免疫荧光法检测小鼠巩膜PPARα（由于PPARα在巩膜细胞中表达量很低，因此采用线性扩增的方法提高cDNA的浓度）、PPARα下游基因和Ⅰ型胶原的改变。通过测量PPARα基因敲除同窝崽小鼠发育的眼部屈光的相关参数，并用实时定量PCR和蛋白印迹法(Western-blot)检测胶原及PPARα及其下游调控的靶基因表达。 结果: 1.形觉剥夺2天，剥夺眼较对照眼巩膜PPARα、PPARα下游基因ME1和Ⅰ型胶原mRNA水平明显下降。2.形觉剥夺4周，剥夺眼较对照眼巩膜PPARα、PPARα下游基因和Ⅰ型胶原mRNA水平略有下降。3.PPARα基因敲除同窝崽小鼠发育的眼部屈光的生物学参数来看，纯合子型小鼠屈光度数较野生型明显偏向近视，杂合子型小鼠的屈光度数在纯合子与野生型之间，但是纯合子型小鼠的眼轴长度比野生型要短。4.纯合子小鼠的巩膜Ⅰ型胶原表达量要比野生型的少。 结论: 形觉剥夺过程中，巩膜PPARα及巩膜Ⅰ型胶原均是下调。PPARα减少可能引起近视的形成。PPARα基因全身敲除后，巩膜组织的Ⅰ型胶原表达量下降，提示PPARα可能对巩膜Ⅰ型胶原具有调控作用进而参与近视的形成过程中。
近视;形觉剥夺现象;过氧化物酶体增殖激活受体α;Ⅰ型胶原;基因表达
温州医科大学
硕士
遗传学
周翔天
2015
中文
R778.110.2
45
2016-03-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）