右美托咪定激活α2AR-FAK信号通路在rI/R致PMVECs高通透性中的保护作用
背景和目的: 肾缺血再灌注(renal ischemia/reperfusion，rI/R)导致的急性肾损伤(acute kidneyinjury，AKI)是围手术期常见并发症，与AKI相关的发病率和死亡率一直居高不下。AKI很少独立出现，往往同时伴有肾外多器官的病理性损伤和功能障碍，此为高死亡率的重要原因。其中，由于肺脏拥有巨大的毛细血管网络，对rI/R引起的血循环促炎因子更为敏感，更易发生急性肺损伤(acute lung injury，ALI)，其病死率也更高。尽管AKI所致ALI逐渐成为研究热点，但临床上仍缺乏有效的防治手段，深入探索AKI病理背景下的肺保护手段和机制具有重要临床意义。 右美托咪定(dexmedetomidine，DEX)是一种作用于中枢或外周的高选择性α2肾上腺素受体(α2 adrenergic receptor，α2AR)激动剂。已有多项研究显示其对多种器官I/R损伤具有保护作用。亦有文章显示DEX可通过激活α2AR减轻肺干湿比重，降低肺部髓过氧化物酶活性，从而减轻rI/R导致的远端肺损伤。同时，另一项研究也显示DEX引起神经系统（海马）的α2AR活化，可进一步激活胞内黏着斑激酶(focaladhesion kinase，FAK)，减少由氧糖剥夺(oxygen glucose deprivation，OGD)诱导的神经凋亡。 FAK是一种非受体型酪氨酸蛋白激酶，介导细胞基质间的粘附，参与外周肌动蛋白的重排以及细胞—基质，细胞—细胞结合复合体构建，降低血管通透性，是调节血管内皮屏障功能的一个重要靶点。因此，本研究通过构建rI/R致ALI小鼠模型，单独或联合应用高选择性α2AR激动剂DEX和α2AR拮抗剂阿替美唑(atipamezole，Atip)，检测在体rI/R小鼠肺微血管通透性。培养C57BL/6J小鼠肺微血管内皮细胞(pulmonarymicrovascular endothelial cells，PMVEC)，用rI/R小鼠血清刺激PMVEC，联合应用DEX，Atip，FAK磷酸化抑制剂，检测PMVEC中磷酸化FAK含量以及总FAK含量，观察F-Actin及内皮细胞层通透性改变，证实如下假设:PMVEC细胞膜上α2AR活化后，激活FAK并通过其介导阻止细胞骨架收缩，维持内皮细胞屏障完整性，从而降低rI/R损伤引起的肺微血管通透性增高。 方法: 1.DEX与rI/R小鼠血清对肺微血管内皮屏障通透性的影响 1.1 构建rI/R小鼠模型，收集rI/R小鼠血清 1.2 C57BL/6J小鼠PMVEC的复苏与培养 1.3 Transwell检测不同浓度rI/R血清致肺微血管内皮细胞层通透性改变的作用 1.4 Transwell检测不同浓度DEX对rI/R血清致肺微血管内皮细胞层通透性增高的影响 2.DEX介导的α2AR激活对小鼠PMVEC中FAK表达的影响 2.1 免疫荧光检测rI/R血清和DEX对PMVEC中P-Tyr397FAK表达情况 2.2 免疫印迹检测rI/R血清和DEX对PMVEC中P-Tyr397FAK与总FAK表达情况 3.DEX介导的FAK激活对rI/R致小鼠肺血管通透性增高的作用与机制 3.1 在体实验检测DEX介导的FAK激活对rI/R小鼠肺微血管通透性改变的作用 3.2 Transwell检测DEX介导的FAK激活对rI/R血清致肺微血管内皮细胞层通透性增高的作用 3.3 免疫荧光检测DEX介导的FAK激活对rI/R血清致PMVEC中F-actin的作用 结果: 1.离体情况下，不同浓度rI/R血清刺激可引起肺微血管内皮细胞层通透性不同程度增高。 2.DEX剂量依赖性降低rI/R血清刺激肺微血管内皮细胞层引起的FITC—荧光标记白蛋白通透率增高 3.离体情况下，20％r I/R血清和0.1μM DEX均可引起PMVEC中P-Tyr397FAK表达增高，抑制α2AR活化后，可抑制0.1μM DEX引起的P-Tyr397FAK表达增高。20％rI/R血清和0.1μM DEX刺激PMVEC，20％r I/R血清引起PMVEC中总FAK表达增高，DEX引起PMVEC中总FAK表达降低，抑制α2AR活化后，可抑制DEX引起的总FAK表达降低。 4.在体或离体情况下，抑制α2AR或FAK激活后，DEX降低rI/R损伤致肺血管通透性增高的作用减弱。PMVEC中F-actin的重聚参与了DEX的这种保护作用。 结论: 1.成功建立了离体AKI致ALI模型。 2.DEX可通过激活α2AR降低rI/R损伤引起的肺血管通透性增高。 3.DEX通过激活α2AR引起FAK磷酸化，降低FAK总量，从而调节F-actin重排可能是降低rI/R损伤致肺血管通透性增高的机制。
肾缺血再灌注致急性肾损伤;右美托咪;肺微血管内皮细胞;高通透性;胞内黏着斑激酶;α2肾上腺素受体
第三军医大学
硕士
麻醉学
鲁开智
2015
中文
R692.05
57
2016-01-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）