植物叶绿体分裂蛋白ARC6和PDV2的表达、纯化与结晶
叶绿体是植物细胞中由双层膜包裹的一种细胞器，承担着影响植物生长和繁殖的重要生理功能。叶绿体通过分裂的方式进行增殖，分裂装置中有若干蛋白质以复合物的形式发挥功能。ARC6是位于叶绿体分裂位点处的单次跨内膜蛋白，N端朝向基质侧，而短小的C端在膜间隙中通过直接相互作用将PDV2募集到分裂位点，ARC6和PDV2的相互作用有效地将位于叶绿体内外的分裂装置联系起来，这一过程如何实现是目前的研究热点之一。 本论文成功构建了关于ARC6(646-801 aa)、PDV2(236-307aa)、ARC6(76-618aa)的克隆，通过将蛋白连接His标签或GST标签，我们成功将其在大肠杆菌内进行了表达和纯化，并获得了ARC6(646-801aa)和PDV2(236-307aa)的蛋白复合物。通过进行结晶实验，我们最终获得了6个可供晶体生长的池液条件，经过一系列的优化，我们最终在HR2-112-3＃条件下获得了高质量的蛋白晶体，并收集到了有效的衍射数据。之后我们成功制备了ARC6(646-801aa)的硒代甲硫氨酸衍生物蛋白，并获得了其晶体，也收到了有效的衍射数据，得到了晶体的相位信息。同时，本研究还对ARC6(674-801aa)和PDV2(280-307aa)进行了共结晶实验，以期望获得其蛋白复合物的结构，目前也已获得了1个条件的晶体。 对于ARC6(76-618aa)蛋白，我们获得了2个可以供晶体生长的池液条件，经过优化之后，目前获得了ARC6(76-618aa)已经优化好的晶体。
蛋白纯化;叶绿体;晶体生长;分裂位点
北京化工大学
硕士
药学
冯越
2015
中文
Q945.11
96
2015-12-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）