siRNA抑制Livin基因的表达对人膀胱癌EJ细胞生长及化疗敏感性的影响
目的：Livin是IAP家族的最新成员。其在正常膀胱组织中不表达，而在人膀胱癌细胞中的高表达可刺激肿瘤细胞的增殖，并提高膀胱癌的术后复发率，更能使肿瘤细胞对化疗药物产生耐药性。因此，其可成为膀胱癌的治疗靶点及预后复发的监测指标。本研究通过观察siRNA抑制人膀胱癌EJ细胞中Livin基因的表达对细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响，为膀胱癌发病机制的研究，以及对膀胱癌的基因和化学治疗提供理论基础和实验依据。 方法：⑴观察通过不同条件转染过的EJ细胞，进行siRNA转染细胞条件的优化及效率的评价。⑵采用脂质体转染技术将人工合成的特异性Livin siRNA转入人膀胱癌EJ细胞中。⑶经Livin siRNA转染细胞24h后，半定量RT-PCR检测各组EJ细胞中Livin mRNA的表达。⑷Western Blot进一步验证转染48h后细胞中Livin蛋白的表达。⑸选用THP作用于转染和未转染的细胞，CCK-8法检测各组细胞的增殖抑制率。(6)流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况。 结果：①用FAM标记的Negative control siRNA转染6孔板中的人膀胱癌EJ细胞，观察到当细胞数量为3×i05/孔，siRNA为100pmol/孔、Lipofectamine(R)2000试剂为5μ l/孔时，有较高转染效率(70％)。当细胞密度为4×103/孔接种于96孔板中，siRNA为5pmol/孔、Lipofectamine(R)2000试剂为0.25μ l/孔时，有较高转染效率(70％)；② Livin特异性siRNA转染人膀胱癌EJ细胞24h后，干扰组（转染siRNA）中Livin mRNA的表达较空白对照组及阴性对照组显著降低(P＜0.01)；③转染48h后，Livin在蛋白水平的表达，较空白对照组及阴性对照组明显下调(P＜0.01)；④经CCK-8检测发现，Livin siRNA干扰组、THP化疗组及干扰+化疗的联合作用组均可抑制EJ细胞的增殖。且联合作用组对细胞的增殖抑制率显著高于单独干扰组及单独化疗作用组(P＜0.01)；⑤流式细胞术的检测结果显示，与空白对照组比较，干扰组、化疗组及联合作用组均可促使膀胱癌EJ细胞的凋亡，且联合作用组的细胞凋亡率显著高于单独干扰组及单独化疗作用组(P＜0.01)。 结论：⑴Livin基因在膀胱癌的发生发展过程中起到一定的促进作用；⑵本实验设计的Livin特异性siRNA能够有效抑制人膀胱癌EJ细胞中Livin基因的表达；⑶通过抑制Livin基因的表达，可有效抑制人膀胱癌EJ细胞的增殖、并促进其凋亡；⑷经LivinsiRNA转染的EJ细胞加强了对化疗药物THP的敏感性。
膀胱肿瘤;药物化疗;吡柔比星;疗效评价
桂林医学院
硕士
泌尿外科学
葛波
2015
中文
R737.14;R730.53
57
2015-12-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）